リボフラビンの生合成に関与するディアミナーゼの大腸菌の存在とレダクターゼ

2つの酵素は、大腸菌Bの抽出物から部分的に精製されており、GTPシクロヒドロラーゼII、2,5-ジアミノ-6-オキシ-4-（5'-ホスホリボシルアミン）ピリミジンの作用の作用の産物の変換を触媒します。-AMINO-2,6-ジオキシ-4-（5'-ホスホリビチリミン）ピリミジン。これらの2つの化合物は現在、リボフラビンの生合成における中間体であると考えられています。酵素変換は2つのステップで発生します。GTPシクロヒドラーゼIIの作用の産物は、最初にリングの炭素2で加水分解脱アミノ化を受け、その後リボシルアミノ基がリビチラミーノ基に還元されます。本明細書で「ディアミナーゼ」と呼ばれる最初のステップを触媒する酵素は、200倍精製されています。この活性は、GTPシクロヒドロラーゼIIによって触媒された反応の積の変換を検出して、ブタネディオンと反応して6,7-ジメチルルマジンを形成する化合物に検出することでアッセイされました。酵素の分子量は約80,000、pH最適9.1です。基質の脱リン酸化型は、酵素の存在下では分離されていません。ここでは「還元酵素」と呼ばれる2番目のステップを触媒する酵素のアッセイは、アルカリホスファターゼで処理した後、ブタネディオンと反応する化合物に対するデアミナーゼ触媒反応の産物の変換の検出を含みます。フォーム6,7-ジメチル-8-リビティルルマジン。レダクターゼの分子量は約40,000、pH最適7.5です。デアミナーゼと同様に、レダクターゼはその基質の脱リン酸化型に作用しません。ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸の還元は、補因子として必要です。還元されたニコチンアミドアデニンジヌクレオチドは、リン酸型と同様に約30％を使用できます。どちらの酵素の活性も、リボフラビン、FMN、またはフラビンアデニンジヌクレオチドによって阻害されません。

Two enzymes have been partially purified from extracts of Escherchia coli B which together catalyze the conversion of the product of the action of GTP cyclohydrolase II, 2,5-diamino-6-oxy-4-(5'-phosphoribosylamine)pyrimidine, to 5-amino-2,6-dioxy-4-(5'-phosphoribitylamine)pyrimidine. These two compounds are currently thought to be intermediates in the biosynthesis of riboflavin. The enzymatic conversion occurs in two steps. The product of the action of GTP cyclohydrolase II first undergoes hydrolytic deamination at carbon 2 of the ring, followed by reduction of the ribosylamino group to a ribitylamino group. The enzyme which catalyzes the first step, herein called the "deaminase," has been purified 200-fold. The activity was assayed by detecting the conversion of the product of the reaction catalyzed by GTP cyclohydrolase II to a compound which reacts with butanedione to form 6,7-dimethyllumazine. The enzyme has a molecular weight of approximately 80,000 and a pH optimum of 9.1. The dephosphorylated form of the substrate is not deaminated in the presence of the enzyme. The assay for the enzyme which catalyzes the second step, referred to here as the "reductase," involves the detection of the conversion of the product of the deaminase-catalyzed reaction to a compound which, after treatment with alkaline phosphatase, reacts with butanedione to form 6,7-dimethyl-8-ribityllumazine. The reductase has a molecular weight of approximately 40,000 and a pH optimum of 7.5. Like the deaminase, the reductase does not act on the dephosphorylated form of its substrate. Reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate is required as a cofactor; reduced nicotinamide adenine dinucleotide can be used about 30% as well as the phosphate form. The activity of neither enzyme is inhibited by riboflavin, FMN, or flavine adenine dinucleotide.