大腸菌における組換えサメVNAR抗体の細胞質およびペリプラズム発現

サメ可変新しい抗原受容体（VNAR）は優れた熱安定性を備えていることが知られており、領域3（CDR3）を決定する長い相補性を決定することで、抗原の裂け目領域に浸透することができました。VNAR内に含まれるシステイン（CYS）残基の数は、従来の抗体よりも大きく、標的タンパク質抗原との相互作用には、ループ内またはループ内領域の両方でジスルフィド結合形成を伴うことが必要です。したがって、適切な発現システムの選択は、機能的なVNARタンパク質生産の溶解度と正しい折りたたみを確保するために重要です。高等生物とは異なり、大腸菌（大腸菌）のタンパク質の翻訳後修飾に影響を与えるための機械は洗練されていません。この状況を克服するために、DSBAシグナルペプチドによるPDSB-28Yベクター融合を、ペリプラズムH8VNAR産生用に設計しました。PET-28Aベクターから得られたサイトゾルタンパク質（468 µg/mL）よりも低い収率（62 µg/mL）を示すペリプラズムタンパク質が示されていますが、吸収の観点から細胞質タンパク質のパフォーマンスよりも優れたパフォーマンスを示しています。しかし、これらの読みは、この実験では、陽性マウスモノクローナル抗体（mAb）C1-13の測定値よりも依然として劣っていました。したがって、マラリアバイオマーカーに対する選択された組換えvNARの結合親和性を改善するには、さらなる調査が必要です。

Shark variable new antigen receptors (VNARs) are known to possess excellent heat-stability, and the long complementarity determining region 3 (CDR3) has permitted it to penetrate into the cleft region of antigens. The number of cysteine (Cys) residues contained within VNAR is greater than in conventional antibodies, entailing disulfide bond formation in both the inter- or intra-loop regions is required for interactions with the target protein antigens. Therefore, the selection of a suitable expression system is important to ensure the solubility and correct folding of functional VNAR protein production. Unlike higher organisms, the machinery for effecting posttranslational modifications of proteins in Escherichia coli (E. coli) are less sophisticated. To overcome this circumstance, a pDSB-28Y vector fusion with DsbA signal peptide was engineered for periplasmic H8VNAR production. Despite the periplasmic proteins showing a lower yield (62 µg/mL) than cytosolic proteins (468 µg/mL) that is obtained from pET-28a vector, it has demonstrated better performance than that of a cytosolic protein in terms of absorbance. However, these readings were still inferior to that of positive control mouse monoclonal antibody (mAb) C1-13 in this experiment. Therefore, further investigation is required to improve the binding affinity of selected recombinant VNAR towards malaria biomarkers.