抗イディオタイプDNAアプタマー親和性精製⁻高温逆位相液体クロマトグラフィ：ベバシズマブのシンプルで正確で選択的なバイオ分析

この研究では、アプタマー親和性浄化に基づいた血漿サンプルからのベバシズマブ検出のシンプルで正確で選択的な生体分析法を提示します。血漿サンプル中のベバシズマブは、ベバシズマブの抗イジオタイプDNAアプタマーで固定された磁気ビーズを使用して精製しました。精製されたベバシズマブをHT-RPLCで分離し、その天然蛍光で検出しました。アプタマーアフィニティビーズを使用して、ベバシズマブは選択的に精製され、クロマトグラムの単一のピークとして検出されました。HT-RPLCは、10分以内に鋭いピークでベバシズマブの良好な分離を達成しました。2つのモノクローナル抗体のキャリブレーション曲線は、1〜50μg/mLの範囲であり、良好な相関係数を示しました（R²> 0.999）。ベバシズマブの検出限界（LOD）および定量化（LLOQ）値は、それぞれ0.15および0.51μg/mLでした。提案された方法は、肺がん患者から得られた血漿サンプルの生体分析に成功裏に適用され、最適な治療プログラムを計画し、バイオシミラーの発生における生物学的等価性の評価のために拡張される可能性があります。

This study presents a simple, accurate, and selective bioanalytical method of bevacizumab detection from plasma samples based on aptamer affinity purification⁻high-temperature reversed-phased liquid chromatography (HT-RPLC) with fluorescence detection. Bevacizumab in plasma samples was purified using magnetic beads immobilized with an anti-idiotype DNA aptamer for bevacizumab. The purified bevacizumab was separated with HT-RPLC and detected with its native fluorescence. Using aptamer affinity beads, bevacizumab was selectively purified and detected as a single peak in the chromatogram. HT-RPLC achieved good separation for bevacizumab with a sharp peak within 10 min. The calibration curves of the two monoclonal antibodies ranged from 1 to 50 μg/mL and showed good correlation coefficients (r² > 0.999). The limit of detection (LOD) and lower limit of quantification (LLOQ) values for bevacizumab were 0.15 and 0.51 μg/mL, respectively. The proposed method was successfully applied to the bioanalysis of the plasma samples obtained from the patients with lung cancer and may be extended to plan optimal therapeutic programs and for the evaluation of biological equivalencies in the development of biosimilars.