磁気活性化細胞ソーティングを使用した神経前駆細胞の変動性の低下と神経培養の純度の改善

IPSC由来の神経前駆細胞（NPC）間の遺伝的およびエピジェネティックな変動は、調査員の技術と選択プロトコルの違いと組み合わせて、NPC系統間の変動に寄与し、その後、神経培養の品質に影響を与えます。したがって、NPCおよびニューロン培養の純度を改善するために、この変動性を低下させる効率的な方法を開発しようとしました。ここでは、初期（<2-3）と後期（> 10）の両方の通過の両方で、CD271-/CD133+細胞のNPC培養物を濃縮するための磁気活性化細胞ソート（MACS）方法について説明します。MACは、蛍光活性化細胞ソート（FACS）に対して同様の選別効率をもたらし、生細胞の収量の増加と細胞ストレスの減少を達成します。さらに、MACS NPCに由来するニューロンは、未解決のNPCに由来する細胞株と比較して、細胞株間の均一性を示しました。Macsは、培養の均一性と一貫性を改善するために、標準のNPC分化とメンテナンスプロトコルに組み込むための安価な手法であると結論付けています。

Genetic and epigenetic variability between iPSC-derived neural progenitor cells (NPCs) combined with differences in investigator technique and selection protocols contributes to variability between NPC lines, which subsequently impacts the quality of differentiated neuronal cultures. We therefore sought to develop an efficient method to reduce this variability in order to improve the purity of NPC and neuronal cultures. Here, we describe a magnetic activated cell sorting (MACS) method for enriching NPC cultures for CD271-/CD133+ cells at both early (<2-3) and late (>10) passage. MACS results in a similar sorting efficiency to fluorescence activated cell sorting (FACS), while achieving an increased yield of live cells and reduced cellular stress. Furthermore, neurons derived from MACS NPCs showed greater homogeneity between cell lines compared to those derived from unsorted NPCs. We conclude that MACS is a cheap technique for incorporation into standard NPC differentiation and maintenance protocols in order to improve culture homogeneity and consistency.