DSS誘発性大腸炎における腸粘膜バリアに対する構成的TL1A発現の効果とメカニズム

目的：炎症性腸疾患（IBD）における腸粘膜バリアにおけるTL1Aの役割はまだ不明です。この研究は、タイトジャンクションタンパク質（TJ）、ミオシン軽鎖キナーゼ（MLCK）、MyD88および腫瘍壊死因子（TNF）受容体関連因子6（TRAF6）の発現レベルと、TL1Aが腸内障壁にどのように影響するかの発現レベルを調査することを目的としています。IBD。 方法：IBDのマウスモデルは、FMS-TL1A-GFPトランスジェニックマウスと野生型マウスを使用して構築されました。形態学的および組織病理学的変化、細菌の転座、結腸粘膜の透過性、およびLPSレベルが評価されました。CACO-2細胞を使用して、TL1AとTNF-αとLPSの関連をさらに調査しました。ZO-1、Occluding、Jama、Claudin-1、Claudin-2、およびClaudin-3を含むTJタンパク質のタンパク質レベルとmRNA変化を、ウエスタンブロットとリアルタイムPCRを使用して調査しました。マウス結腸のMLCK、MyD88およびTNF受容体関連因子-6（TRAF6）、およびTNF-αMRNAのタンパク質変化をさらに評価しました。 結果：IBDモデルは正常に構築されました。結腸のクーパーHSスコアと組織病理学的スコアは、コントロール/WTグループよりもDSS/WTグループ（P <0.05）よりも高く、コントロール/TGグループ（P <0.05）よりもDSS/TGグループの方が高く、DSSで高かった/TGグループDSS/WTグループよりも。PAS、結腸の結腸透過性、およびFITC-D検査では、同様の結果と傾向が示されました。コントロール/WTグループと比較して、TL1AおよびClaudin-2のレベルは高く、ZO-1、Occludin、Jama、Claudin-1、およびClaudin-3のレベルはDSS/WTグループで低かった（P <0.05）。コントロール/TGグループと比較して、TL1AおよびClaudin-2のレベルは高く、ZO-1、Occludin、Jama、Claudin-1、およびClaudin-3のレベルはDSS/TGグループで低かった。CACO-2+TNF-αグループと比較して、CACO-2+LV-TNFSF15+TNF-αグループのオクルディンとクローディン-1の発現レベルは有意に低かった（P <0.05）。P-MLCレベルは大幅に高かった。CACO-2+LPSグループと比較して、オクルディンとクローディン-1の発現レベルは、CACO-2+LV-TNFSF15+LPSグループで有意に減少しました。MyD88およびTRAF6発現レベルは大幅に増加しました。 結論：結果は、TL1AがIBDのマウスモデルの腸上皮バリアを損なう可能性があり、MLCK/P-MLC経路とLPSを介したMyD88/TRAF6経路を介してTJ発現を調節する可能性があることを示唆しました。

OBJECTIVE: The role of TL1A in the intestinal mucosa barrier in inflammatory bowel disease (IBD) is still unclear. This study was aimed to investigate the expression levels of tight junction protein (TJ), myosin light chain kinase (MLCK), MyD88 and tumor necrosis factor (TNF) receptor-associated factor-6 (TRAF6) and how TL1A influences the intestinal barrier in IBD. METHODS: The mouse models of IBD were built using FMS-TL1A-GFP-transgenic mice and wild-type mice. The morphological and histopathological changes, bacterial translocation, permeability of colonic mucosa, and LPS level were assessed. Caco-2 cells were used to further investigate the association between TL1A and TNF-α and LPS. The protein level and mRNA changes of TJ proteins including ZO-1, occluding, JAMA, claudin-1, claudin-2, and claudin-3 were investigated using Western blot and real-time PCR. Protein changes of MLCK, MyD88 and TNF receptor-associated factor-6 (TRAF6), and TNF-α mRNA in the mouse colon were further assessed. RESULTS: The IBD models were successfully built. Cooper HS score and histopathological score of the colon were higher in DSS/WT group than in control/WT group (P < 0.05), higher in DSS/Tg group than in control/Tg group (P < 0.05), and higher in DSS/Tg group than in DSS/WT group. PAS, colonic permeability of the colon, and FITC-D examination showed the similar results and trends. Compared with control/WT group, the levels of TL1A and claudin-2 were higher and the levels of ZO-1, occludin, JAMA, claudin-1, and claudin-3 were lower in DSS/WT group (P < 0.05). Compared with control/Tg group, the levels of TL1A and claudin-2 were higher and the levels of ZO-1, occludin, JAMA, claudin-1, and claudin-3 were lower in DSS/Tg group. Compared with Caco-2 + TNF-α group, the expression level of occludin and claudin-1 in Caco-2 + LV-TNFSF15 + TNF-α group was significantly lower (P < 0.05); p-MLC level was significantly higher. Compared with Caco-2 + LPS group, the expression level of occludin and claudin-1 significantly decreased in Caco-2 + LV-TNFSF15 + LPS group; MyD88 and TRAF6 expression level significantly increased. CONCLUSION: The results suggested that TL1A could impair intestinal epithelial barrier in the mouse model of IBD and might regulate TJ expression via MLCK/p-MLC pathway and LPS-mediated MyD88/TRAF6 pathway.