Paracoccus denitrificansからのNadh Dehydrogenase複合体の精製と特性評価

NADHデヒドロゲナーゼ複合体は、NABRで抽出し、NAD-アガロースカラムで精製した抽出により、有酸素症パラコッカスデニトリフィアン細胞の原形質膜から分離されました。分離されたNADHデヒドロゲナーゼ複合体のNADH-ユビキノン-1レダクターゼ活性は、NABR抽出物のそれよりも約10倍高かった。準備は、ポリペプチドとは異なり、10個（6個のメジャーおよび4マイナー）で構成されており、酸化的リン酸化システムの他の酵素複合体に特徴的な識別可能な成分と活動がありませんでした。精製された酵素には、非共有結合されたFMN、非ヘム鉄、および酸性硫化物が含まれていました。FMNと非ヘム鉄に対する酸塩硫化物の比率は、約12:11約12:11であり、複数の鉄硫黄クラスターの存在を示唆していました。抗血清と牛肉心臓ミトコンドリア複合体Iおよびタンパク質画分と交差した分離されたNadhデヒドロゲナーゼ複合体は、そこから導出されたタンパク質画分であり、無傷の複合体Iおよびその鉄硫黄タンパク質および鉄硫黄タンパク質タンパク質タンパク症のタンパク質と同様の抗原酵素の存在を示しています。分数。

An NADH dehydrogenase complex was isolated from the plasma membranes of aerobically grown Paracoccus denitrificans cells by extraction with NaBr and purification on an NAD-agarose column. The NADH-ubiquinone-1 reductase activity of the isolated NADH dehydrogenase complex was about 10 times higher than that of the NaBr extract. The preparation was composed of 10 (6 major and 4 minor) unlike polypeptides, and lacked identifiable components and activities characteristic of other enzyme complexes of the oxidative phosphorylation system. The purified enzyme contained noncovalently bound FMN, nonheme iron, and acid-labile sulfide. The ratio of FMN to nonheme iron to acid-labile sulfide was 1:13 approximately 14:11 approximately 12, suggestive of the presence of multiple iron-sulfur clusters. The isolated NADH dehydrogenase complex cross-reacted with antisera to beef heart mitochondrial complex I and protein fraction derived therefrom, indicating the presence in the Paracoccus enzyme of antigenic sites similar to those in the intact complex I and its iron-sulfur protein and possibly hydrophobic protein fractions.