アミノメチルクマリン酢酸：タンパク質の新しい蛍光標識剤

新しい蛍光タンパク質標識剤である7-アミノ-4-メチルクマリン-3-酢酸（AMCA）は、UV光（350 nm）で活性化すると青い領域（440-460 nm）で放出されます。活性試薬は、軽度の条件下でリジン残基と反応して光安定性アミドリンクを形成するn-ヒドロキシシジニミドエステルです。フルオレセインイソチオシアネート（FITC）の30 nmと比較して、100 nmのストークスシフトにより、刺激的で放出される放射線の簡単なフィルター識別が可能になります。薬剤は、サンドイッチ技術を使用して、ヒト腎臓糸球体の蛍光化学的検査に使用されており、FITC標識抗体を使用した同じ手順と比較して実証されています。良好な量子収量は、水銀スペクトル内の便利な放出系統と相まって、蛍光標識セクションの写真曝露時間を、対応するFITCコンジュゲートに必要な4分の1に減らすことができます。AMCA-免疫グロブリンコンジュゲートは光退色の影響を受けにくく、2年以上の-20度Cで貯蔵寿命を持っていました。

A new fluorescent protein labelling agent, 7-amino-4-methyl coumarin-3-acetic acid (AMCA), emits in the blue region (440-460 nm) on activation with UV light (350 nm). The active reagent is the N-hydroxysuccinimide ester which reacts with lysine residues under mild conditions to form photostable amide links. The Stokes shift of 100 nm compared to 30 nm for Fluorescein isothiocyanate (FITC) allows easy filter discrimination of exciting and emitting radiation. The agent has been demonstrated in use for fluorohistochemical examination of human kidney glomeruli, using the sandwich technique and compared with the same procedure using FITC-labelled antibodies. The good quantum yield coupled with convenient emission lines in the mercury spectrum allows photographic exposure time of fluorescent labelled sections to be reduced to a quarter of that required for a corresponding FITC conjugate. AMCA-immunoglobulin conjugates were not susceptible to photobleaching and have a storage life at -20 degrees C of more than two years.