擬似スパイチャーを使用したスパイタグタンパク質のスパイ＆ゴーの浄化により、オリゴマー化ツールボックスにアクセスする

ペプチドタグは重要なリソースであり、多様なタンパク質を精製する一貫したプロセスを可能にしながら、最小限の変化を導入します。ただし、ペプチドタグは、多くの場合、精製後の最小限の利点を提供します。以前にSpytagを設計し、タンパク質パートナーのSpycatcherと不可逆的な結合を形成しました。Spytagは、アンカー、ブリッジ、またはマルチマリスタンパク質への簡単なルートを提供します。ここでは、Spytagを使用してタンパク質精製を有効にして、Spy＆Goを確立します。Rational Engineeringを通じて、Spydockを生成しました。これは、Spytag融合をキャプチャし、効率的な溶出を可能にしました。Spy＆Goは、Escherichia coliからのSpytag融合の敏感な精製を有効にし、His-Tag/Nickel-Nitrilotriacitic酸よりも優れた純度を与えました。SPY＆GOは、哺乳類で発現、N末端、C末端または内部SPYTAGの浄化を許可しました。オリゴマー化ツールボックスとして、スパイチャーリンクコイルドコイルのパネルを確立したため、スパイタグ融合は二量体化、三角化、四層化、ペンタメル化、ヘキサマージング、またはゼルタメル化できます。死の受容体5刺激のためのオリゴマーを組み立てると、がん細胞死に対する多価効果を調査しました。Spy＆Goは、単純なオリゴマー化と組み合わせて、シグナル伝達の多価を調査するための広範なアプリケーションを持つ必要があります。

Peptide tags are a key resource, introducing minimal change while enabling a consistent process to purify diverse proteins. However, peptide tags often provide minimal benefit post-purification. We previously designed SpyTag, forming an irreversible bond with its protein partner SpyCatcher. SpyTag provides an easy route to anchor, bridge or multimerize proteins. Here we establish Spy&Go, enabling protein purification using SpyTag. Through rational engineering we generated SpyDock, which captures SpyTag-fusions and allows efficient elution. Spy&Go enabled sensitive purification of SpyTag-fusions from Escherichia coli, giving superior purity than His-tag/nickel-nitrilotriacetic acid. Spy&Go allowed purification of mammalian-expressed, N-terminal, C-terminal or internal SpyTag. As an oligomerization toolbox, we established a panel of SpyCatcher-linked coiled coils, so SpyTag-fusions can be dimerized, trimerized, tetramerized, pentamerized, hexamerized or heptamerized. Assembling oligomers for Death Receptor 5 stimulation, we probed multivalency effects on cancer cell death. Spy&Go, combined with simple oligomerization, should have broad application for exploring multivalency in signaling.