PCR産物のTAクローニングと鈍い終了クローニングのための一連の高効率ベクトル

効率的なPCRクローニング方法は、DNAクローンプロセスの効率を大幅に改善できるため、現代の分子生物学では不可欠です。ここでは、TAクローニングと鈍い終了クローニングのための3つのベクトルの開発について説明します。具体的には、PCRTとPCRzerotは、TAクローンの効率を改善するように設計されています。PcRzerotをPCRzeroとともに使用して、CCDB遺伝子を使用した鈍いエンドのクローニングを促進することもできます。PCRzeroとPcrzerotを使用してゴールデンゲート反応を適用して、非消化された円形ベクトルとPCR産物を使用した直接PCRクローンプロトコルを開発しました。この直接的なPCRクローンプロトコルは、事前に消化されたベクターおよびPCR産物を使用して従来のPCRクローニングによって得られたものに匹敵するコロニー形成率とクローニング効率をもたらしました。私が設計した3つのプラスミドは、addgene（https://www.addgene.org/）から入手できます。

An efficient PCR cloning method is indispensable in modern molecular biology, as it can greatly improve the efficiency of DNA cloning processes. Here, I describe the development of three vectors for TA cloning and blunt-end cloning. Specifically, pCRT and pCRZeroT were designed to improve the efficiency of TA cloning. pCRZeroT can also be used with pCRZero to facilitate blunt-end cloning using the ccdB gene. Using pCRZero and pCRZeroT and applying the Golden Gate reaction, I developed a direct PCR cloning protocol with non-digested circular vectors and PCR products. This direct PCR cloning protocol yielded colony-formation rates and cloning efficiencies that are comparable with those obtained by conventional PCR cloning with pre-digested vectors and PCR products. The three plasmids I designed are available from Addgene ( https://www.addgene.org/ ).