ニュートラルエンドペプチダーゼ（NEP）阻害剤-Thiorphan、Sialorphin、およびその誘導体は、in vitroで結腸直腸癌細胞に対して抗増殖活性を発揮します

ニュートラルエンドペプチダーゼ（NEP）は、異なる腫瘍の発生に関係する酵素です。結腸直腸癌（CRC）。この研究では、CRC細胞に対するNEP阻害剤、チオファン（合成化合物）およびシアロフィン（天然に存在するペンタペプチド）の抗癌効果を調査しました。さらに、シアロフィンのいくつかの誘導体を合成しました（アラニンスキャン類似体：AHNPR、QANPR、QHAPR、QHNAR; N-アセチル化されたシアロフィン; C-アミド化されたシアロフィン、およびCRC細胞上のこれらの阻害剤の生物学的活性を調べることを調べることを調べることができます。。CRC細胞株（SW620およびLS180）および正常なヒト線維芽細胞（HSF）に対するNEP阻害剤の細胞毒性活性を評価しました。さらに、増殖、細胞周期の進行、アポトーシスの誘導、およびCRC細胞のMTORC1シグナル伝達経路タンパク質のリン酸化のレベルに対するNEP阻害剤の影響を調べました。NEP阻害剤は、HSF細胞に対して非細胞毒性でした。しかし、それらのほとんどは生存率をわずかに低下させ、CRC細胞の増殖を阻害しました。シアロフィンまたはそのアラニンスキャン類似体のN-アセチル化またはCアミド化は、CRC細胞に対するNEP阻害剤の抗増殖活性の減少または廃止をもたらしました。さらに、チオルファンとシアロフィンは、他のCRC細胞成長阻害剤（心房性ナトリウム利尿ペプチドANPおよびメルファランメル）の抗増殖活性を促進しました。試験阻害剤の抗増殖効果に関与するメカニズムは、NEPを介して媒介され、G0/G1相での細胞周期停止の誘導、ERK1/2の活性の増加、およびMTORのリン酸化レベルの低下に関連しています（Ser2448）、4E-BP1、およびP70S6K。しかし、NEP阻害剤はCRC細胞にアポトーシスを誘導しませんでした。これらの結果は、チオルファンとシアロフィンまたはその誘導体ANPR、QANPR、QHAPR、およびQHNARがCRC患者の治療に薬剤として使用される可能性があることを示しています。

Neutral endopeptidase (NEP) is an enzyme implicated in development of different tumors, e.g. colorectal cancer (CRC). In this study, the anti-cancer effects of NEP inhibitors, thiorphan (synthetic compound) and sialorphin (naturally occurring pentapeptide) on CRC cells were investigated. Moreover, we synthesized some derivatives of sialorphin (alanine scan analogues: AHNPR, QANPR, QHAPR, QHNAR; N-acetylated sialorphin; C-amidated sialorphin, and C-amidated alanine scan analogues) to examine the biological activity of these inhibitors on CRC cells. The cytotoxic activity of the NEP inhibitors against CRC cell lines (SW620 and LS180) and normal human fibroblasts (HSF) was evaluated. Additionally, the influence of NEP inhibitors on proliferation, cell cycle progression, induction of apoptosis, and the level of phosphorylation of MAP kinases and mTORC1 signaling pathway proteins in CRC cells were examined. The NEP inhibitors were non-cytotoxic to HSF cells; however, most of them slightly decreased the viability and inhibited proliferation of CRC cells. The N-acetylation or C-amidation of sialorphin or its alanine scan analogues resulted in decreased or abolished anti-proliferative activity of the NEP inhibitors towards the CRC cells. Additionally, thiorphan and sialorphin enhanced the anti-proliferative activity of other CRC-cell growth inhibitors (atrial natriuretic peptide-ANP and melphalan-MEL). The mechanisms involved in the anti-proliferative effects of the tested inhibitors were mediated via NEP and associated with induction of cell cycle arrest in the G0/G1 phase, increased activity of ERK1/2, and a reduced level of phosphorylation of mTOR (Ser2448), 4E-BP1, and p70S6K. However, the NEP inhibitors did not induce apoptosis in the CRC cells. These results have indicated that thiorphan and sialorphin or its derivatives AHNPR, QANPR, QHAPR, and QHNAR have the potential to be used as agents in treatment of patients with CRC.