Bacillus subtilisの二次RNAポリメラーゼSigma因子の遺伝的研究

Sigma B（Sigma 37）は、グラム陽性細菌菌液に見られるRNAポリメラーゼSigma因子の二次種です。Sigma Bの機能を遺伝的に研究するために、in vitroでSigma B含有RNAポリメラーゼによって転写されることが知られている遺伝子（CTC）の発現をブロックする突然変異を求めました。CRLと呼ばれるそのような突然変異の1つは、Sigma Bの構造遺伝子（SIGB）のまたはその近くにマッピングすることがわかった。SIGBの変異がCTCの転写を防ぐかどうかを直接決定するために、挿入と欠失を伴うB. subtilis染色体のSIGBを置き換えた。Sigma Bコーディングシーケンスを破壊した変異。CRLと同様に、これらのin vitro構築された変異はCTCの発現をブロックしましたが、生存率、胞子形成、胞子形成遺伝子の発現、または胞子形成関連アルカリプロテアーゼの産生にほとんどまたはまったく影響を与えませんでした。レポーター遺伝子XyleおよびLACZにCTCの融合を使用して、CTC発現を促進する変異も特定しました。SOCBと呼ばれるそのような突然変異の1つは、SIGBのすぐ下流にあるオープンリーディングフレームに配置されていることがわかりました。

sigma B (sigma 37) is a secondary species of RNA polymerase sigma factor found in the gram-positive bacterium Bacillus subtilis. To study the function of sigma B genetically, we sought mutations that block the expression of a gene (ctc) known to be transcribed by sigma B-containing RNA polymerase in vitro. One such mutation, called crl, was found to map in or near the structural gene (sigB) for sigma B. To determine directly whether mutations in sigB would prevent transcription of ctc, we replaced sigB in the B. subtilis chromosome with insertion and deletion mutations that disrupted the sigma B coding sequence. Like crl, these in vitro-constructed mutations blocked expression of ctc, but had little or no effect on viability, sporulation, expression of the sporulation gene spoVG, or production of sporulation-associated alkaline protease. Using fusions of ctc to the reporter genes xylE and lacZ, we also identified mutations that enhanced ctc expression. One such mutation, called socB, was found to be located in an open reading frame immediately downstream of sigB.