腫瘍条件の培地を使用した単球由来の腫瘍関連マクロファージの生成は、in vitroで腫瘍関連マクロファージを研究するための新しい方法を提供します

背景：腫瘍関連マクロファージ（TAM）が拡大し、腫瘍微小環境内で腫瘍促進特性を示します。TAMを研究するための現在の方法は、癌の種類全体で再現されておらず、多くの場合、腫瘍からの外因性成長因子を含めていません。これは、in vivoのTAM分化の重要な要因です。 方法：この研究では、腫瘍条件の培地（TCM）を使用して単球由来TAMを生成するin vitro法と、IL-4、IL-10、およびM-CSFを含むサイトカインカクテルを利用して、表現型、形態、および形態学を研究しました。複数の癌タイプにわたるTAMの機能。TCMは、2つの乳癌細胞株とエプスタインバーウイルス陽性リンパ腫細胞株から生成されました。in vitroで生成されたTAMの特性は、in vitroで生成されたM1およびM2-のマクロファージと癌患者から分離されたTAMと比較されました。 結果：この方法で生成されたTAMは、M2-Likeマクロファージと比較してCD163/CD206の共発現の増加を示しました（それぞれ87％と36％）。in vitroで生成されたTAMは、in vitroで生成されたM2様マクロファージと比較して、機能マーカーIL-6、IL-10、CCL2、C-MYC、INOS、およびアルギナーゼの転写レベルの増加を示しました。機能的には、in vitroで生成されたTAMは、TAMと共培養された場合、TAMの増殖（M1様マクロファージから47％減少）を阻害し、天然キラー細胞によるIFN-γの産生が阻害されました（44％）。さらに、in vitroで生成されたTAMは、腫瘍細胞の成長と生存を促進する可溶性因子を分泌しました。 結論：患者TAMへのアクセスが制限されていることは、in vitroでTAMを生成する方法の必要性を強調しています。私たちのデータは、TCMとIL-4、IL-10、およびM-CSFのサイトカインカクテルを使用して、単球由来TAMを確実に生成できることを確認しています。TAMが免疫細胞機能を阻害する能力を考えると、癌の状況でTAMを枯渇または非活性化する方法の継続的な研究が必要です。

BACKGROUND: Tumor-associated macrophages (TAM) are expanded and exhibit tumor-promoting properties within the tumor microenvironment. Current methods to study TAM have not been replicated across cancer types and often do not include exogenous growth factors from the tumor, a key factor in TAM differentiation in vivo. METHODS: In this study, an in vitro method to generate monocyte- derived TAM using tumor- conditioned media (TCM) and a cytokine cocktail containing IL-4, IL-10, and M-CSF was utilized to study the phenotype, morphology, and function of TAM across multiple cancer types. TCM was generated from two breast cancer cell lines and an Epstein-Barr virus-positive lymphoma cell line. The properties of in vitro generated TAM were compared to in vitro generated M1 and M2- like macrophages and TAM isolated from patients with cancer. RESULTS: TAM generated in this fashion displayed an increase in CD163/CD206 co-expression compared to M2- like macrophages (87 and 36%, respectively). TAM generated in vitro exhibited increased transcript levels of the functional markers IL-6, IL-10, CCL2, c-Myc, iNOS, and arginase compared to in vitro generated M2-like macrophages. Functionally, in vitro generated TAM inhibited the proliferation of T cells (47% decrease from M1-like macrophages) and the production of IFN-γ by natural killer cells was inhibited (44%) when co-cultured with TAM. Furthermore, in vitro generated TAM secreted soluble factors that promote the growth and survival of tumor cells. CONCLUSIONS: Limited access to patient TAM highlights the need for methods to generate TAM in vitro. Our data confirm that monocyte-derived TAM can be generated reliably using TCM plus the cytokine cocktail of IL-4, IL-10, and M-CSF. Given the ability of TAM to inhibit immune cell function, continued study of methods to deplete or deactivate TAM in the setting of cancer are warranted.