ウロリチンAは、p53依存性およびp53に依存しない方法で前立腺癌細胞死を誘導します

目的：ザクロとクルミは、広く消費されている食事源であり、エラギタンニン（ETS）を含むいくつかの生物活性化合物を含んでいます。ETSは、腸内微生物叢でウロリチンA（UA）に代謝されるポリフェノールです。P53は、約半分の癌でMDM2活性化を介してその活性を失った腫瘍抑制因子です。この研究の目的は、前立腺癌細胞株におけるP53-MDM2相互作用経路に対するUAの影響を調査することでした。 方法：異なるP53遺伝子型を抱く3つのヒト前立腺癌細胞株が使用されました。LNCAP（P53+/+）、22RV1（P53 - /+）およびPC3（P53 - / - ）。細胞生存率は、Celltiter-Glo発光アッセイによって決定されました。アポトーシスは、フローサイトメトリーでアネキシンVを測定することにより確認されました。p53、その標的タンパク質、およびアポトーシスマーカーの発現は、ウエスタンブロッティングによって測定されました。リアルタイムQPCRを使用して、p53の主な標的遺伝子であるp21の遺伝子発現を測定しました。共免疫沈降 - 免疫ブロッティングを使用して、P53とMDM2の間の相互作用の阻害を評価し、MDM2を介したP53ポリユビキチン化に対するUAの効果を評価しました。 結果：UAがCAP細胞の生存率を阻害し、アポトーシスを誘導したことがわかりました。22RV1およびLNCAPでは、UAがp53タンパク質発現とその主な標的タンパク質P21、およびMDM2の増加を発見し、自己調節フィードバックループを形成しました。さらに、UAはp53プロアポトーシスタンパク質PUMAおよびNOXAを増加させました。さらに、UAはP53とMDM2の間の相互作用を阻害し、MDM2を介したP53ポリユビキチン化を阻害しました。UAは、PC3細胞におけるMDM2およびXIAPタンパク質発現をダウンレギュレートし、p53に依存しない方法でp21およびp14ARFを上方制御しました。 結論：P53-MDM2経路に対するUAの影響は、その抗がん効果に部分的に寄与する可能性があります。

PURPOSE: Pomegranate and walnuts are widely consumed dietary sources and contain several bioactive compounds, including the ellagitannins (ETs). ETs are polyphenols that are metabolized in the gut microbiota to urolithin A (UA). p53 is a tumor suppressor that lost its activity through MDM2 activation in about half cancers. The purpose of this study was to investigate the influence of UA on the p53-MDM2 interaction pathway in prostate cancer cell lines. METHODS: Three human prostate cancer cell lines were used that harbor different p53 genotypes; LNCaP (p53+/+), 22RV1(p53-/+) and PC3 (p53-/-). Cell viability was determined by CellTiter-Glo Luminescent assay. Apoptosis was confirmed by measuring annexin V by flow cytometry. The expression of p53, its target proteins, and apoptotic markers were measured by western blotting. Real-time qPCR was used to measure the gene expression of p21, a main target gene of p53. Co-immunoprecipitation-immunoblotting was used to assess the inhibition of interactions between p53 and MDM2 and to assess the effect of UA on MDM2-mediated p53 polyubiquitination. RESULTS: We found UA inhibited CaP cells' viability and induced apoptosis. For 22RV1 and LNCaP, we found UA increased p53 protein expression and its main target protein, p21, and MDM2, forming an autoregulatory feedback loop. In addition, UA increased the p53 proapoptotic proteins PUMA and NOXA. Moreover, UA inhibited the interaction between p53 and MDM2 and inhibited MDM2-mediated p53 polyubiquitination. UA downregulated MDM2 and XIAP protein expression in PC3 cells and upregulated p21 and p14ARF in a p53-independent manner. CONCLUSION: The influencing of UA on p53-MDM2 pathway may partly contribute to its anticancer effect.