CDR3内で異なるシステイン数を持つサメVNARドメインの合成ライブラリ

サメからの新しい抗原受容体（VNAR）の可変ドメインは、小さなサイズ（12-15 kDa）、熱および化学的安定性、および優れた組織浸透など、従来の抗体分子と比較して特別な特性を提示します。治療薬または診断剤としてのソース。したがって、異なる抗原を認識するVNAR抗体の開発と選択に使用される技術を改善することが不可欠です。合成抗体ライブラリの開発は、望ましい特性を持つ抗体の生成に高速なオプションを提供します。この作業では、3つの合成抗体ライブラリーが構築されました。システイン（CYS）なし、1つのCYS、およびCDR3内に2つのCys残基を備えています。CDR3にCysが存在するか欠けているかが合成ライブラリからのVNARクローンの分離に有利かどうかを判断する目的。ライブラリは、6つの哺乳類タンパク質に対して選択されて検証されました。抗原のそれぞれについて少なくとも1つのVNARが見つかり、CDR3のCYSなしでライブラリから来るクローンがすべての抗原で選択されました。分離された抗VEGF抗体を使用したin vitro血管新生アッセイは、これらのVNARがin vitro血管新生を阻害できることを示唆しています。抗VEGF抗体のシリコ分析では、合成ライブラリのVNARがシリコモデリングにより親和性成熟と抗体に匹敵する可能性があることが示されました。

The variable domain of New Antigen Receptors (vNAR) from sharks, present special characteristics in comparison to the conventional antibody molecules such as: small size (12-15 kDa), thermal and chemical stability and great tissue penetration, that makes them a good alternative source as therapeutic or diagnostic agents. Therefore, it is essential to improve techniques used for the development and selection of vNAR antibodies that recognize distinct antigens. The development of synthetic antibody libraries offers a fast option for the generation of antibodies with the desired characteristics. In this work three synthetic antibody libraries were constructed; without cysteines (Cys), with one Cys and with two Cys residues within its CDR3, with the objective of determining whether the presence or absence of Cys in the CDR3 favors the isolation of vNAR clones from a synthetic library. The libraries were validated selecting against six mammalian proteins. At least one vNAR was found for each of the antigens, and a clone coming from the library without Cys in the CDR3 was selected with all the antigens. In vitro angiogenesis assay with the isolated anti-VEGF antibodies, suggest that these vNARs are capable of inhibiting in vitro angiogenesis. In silico analysis of anti-VEGF antibodies showed that vNARs from synthetic libraries could rival antibodies with affinity maturation by in silico modeling.