補体活性化を誘導する抗体の能力を評価するためのハイスループット、ビーズベースの抗原特異的アッセイ

補体システムは、非特異的な直接病原体認識と殺害の両方を介して、または補体固定抗体による抗原特異的間接動員の両方を介して、病原体に対する自然免疫防御に重要な役割を果たします。補体活性化を測定するためのさまざまなアッセイが開発されていますが、補体活性化を促進する抗体の能力の定性的な違いを尋問するためのハイスループットのサンプルスパリングアプローチを提供する人はほとんどいません。ここでは、ほぼすべての抗原に対する抗原特異的抗体依存性補体活性化を評価するために、ハイスループット、サンプルスパーリング、ビーズベースのアッセイを提示します。緩衝液組成の最適化、免疫複合体形成の速度論、および補体源はすべて、抗体依存性補体堆積（ADCD）を分析するための堅牢で非常に柔軟でハイスループットのアプローチの開発に批判的に貢献します。したがって、最適化されたビードベースの抗原特異的アッセイは、病原体や疾患を介した抗体依存性補体の活性化をプロファイルするための単純で高度に適応性のあるプラットフォームを表します。

The complement system plays a critical role in innate immune defense against pathogens, both via non-specific direct pathogen recognition and killing or via antigen-specific indirect recruitment by complement fixing antibodies. While various assays for measuring complement activation have been developed, few provide a high-throughput, sample-sparing approach to interrogate the qualitative differences in the ability of antibodies to drive complement activation. Here we present a high-throughput, sample-sparing, bead-based assay to evaluate antigen-specific antibody-dependent complement activation against nearly any antigen. Optimization of buffer composition, kinetics of immune complex formation, as well as complement source all contribute critically to the development of a robust, highly flexible and high-throughput approach to analyze antibody-dependent complement deposition (ADCD). Thus, the optimized bead-based, antigen-specific assay represents a simple, highly adaptable platform to profile antibody-dependent complement activation across pathogens and diseases.