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はじめに：脂肪由来間質/幹細胞（ASC）は、広範囲の疾患状態の細胞治療薬としての可能性を秘めています。ただし、多くの拡張プロトコルは、細胞培養栄養補助食品としての胎児ウシ血清（FBS）の使用に依存しています。現在の研究では、期限切れのヒト血小板（HPLS）からの溶解物がFBS代替品としての置換を調査しています。 方法：認定された血液中心からの期限切れのヒト血小板は、凍結/解凍によって溶解し、血球細胞計細胞数を使用した増殖に関するヒトASCを調べるために使用され、コロニー形成ユニット繊維芽細胞（CFU-F）頻度、フローサイトメトリーによる表面免疫表現型、および組織化学染色による三陽イネージ（脂肪細胞、軟骨細胞、骨芽細胞）分化電位。 結果：増殖アッセイは、HPLSが濃度依存的にASCの増殖をサポートし、10％FBSの存在下で観察されたレベルを超えたレベルに達することを実証しました。0.75％HPLSの濃度は、増殖、免疫表現型、およびCFU-F頻度に関して細胞培養培地で利用された場合、10％FBSに相当しました。骨形成、脂肪生成、および軟骨形成分化培地に添加すると、両方のサプリメントが染色による適切な分化を示しました。 結論：HPLSは、臨床研究に適したヒトASCの培養、拡大、および区別におけるFBSの効果的な代替品です。ただし、臨床応用と規制当局の承認のためにHPLSを検証するには、追加のアッセイと分析が必要です。
はじめに：脂肪由来間質/幹細胞（ASC）は、広範囲の疾患状態の細胞治療薬としての可能性を秘めています。ただし、多くの拡張プロトコルは、細胞培養栄養補助食品としての胎児ウシ血清（FBS）の使用に依存しています。現在の研究では、期限切れのヒト血小板（HPLS）からの溶解物がFBS代替品としての置換を調査しています。 方法：認定された血液中心からの期限切れのヒト血小板は、凍結/解凍によって溶解し、血球細胞計細胞数を使用した増殖に関するヒトASCを調べるために使用され、コロニー形成ユニット繊維芽細胞（CFU-F）頻度、フローサイトメトリーによる表面免疫表現型、および組織化学染色による三陽イネージ（脂肪細胞、軟骨細胞、骨芽細胞）分化電位。 結果：増殖アッセイは、HPLSが濃度依存的にASCの増殖をサポートし、10％FBSの存在下で観察されたレベルを超えたレベルに達することを実証しました。0.75％HPLSの濃度は、増殖、免疫表現型、およびCFU-F頻度に関して細胞培養培地で利用された場合、10％FBSに相当しました。骨形成、脂肪生成、および軟骨形成分化培地に添加すると、両方のサプリメントが染色による適切な分化を示しました。 結論：HPLSは、臨床研究に適したヒトASCの培養、拡大、および区別におけるFBSの効果的な代替品です。ただし、臨床応用と規制当局の承認のためにHPLSを検証するには、追加のアッセイと分析が必要です。
INTRODUCTION: Adipose derived stromal/stem cells (ASCs) hold potential as cell therapeutics for a wide range of disease states; however, many expansion protocols rely on the use of fetal bovine serum (FBS) as a cell culture nutrient supplement. The current study explores the substitution of lysates from expired human platelets (HPLs) as an FBS substitute. METHODS: Expired human platelets from an authorized blood center were lysed by freeze/thawing and used to examine human ASCs with respect to proliferation using hematocytometer cell counts, colony forming unit-fibroblast (CFU-F) frequency, surface immunophenotype by flow cytometry, and tri-lineage (adipocyte, chondrocyte, osteoblast) differentiation potential by histochemical staining. RESULTS: The proliferation assays demonstrated that HPLs supported ASC proliferation in a concentration dependent manner, reaching levels that exceeded that observed in the presence of 10% FBS. The concentration of 0.75% HPLs was equivalent to 10% FBS when utilized in cell culture media with respect to proliferation, immunophenotype, and CFU-F frequency. When added to osteogenic, adipogenic, and chondrogenic differentiation media, both supplements showed appropriate differentiation by staining. CONCLUSION: HPLs is an effective substitute for FBS in the culture, expansion and differentiation of human ASCs suitable for pre-clinical studies; however, additional assays and analyses will be necessary to validate HPLs for clinical applications and regulatory approval.
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