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背景：AOAC First Action Method 2017.03、乳児用粉乳における総トリプトファンのHPLC測定、および酵素加水分解後の成人/小児栄養式のHPLC測定では、多層研究が完了しました。目的：7か国の10人の研究所が多層研究に参加しました。各検査室では、14人の乳児、小児、成人の栄養素を複製しました。分析された製品マトリックスには、牛乳、大豆、部分的に加水分解された牛乳、部分的に加水分解された大豆、元素ベースの乳児用粉砕剤、牛乳ベースの乳児処方飼育液（RTF）液体、成人の低脂肪粉末、成人の高脂肪および高タンパク質の既製栄養素が含まれていました。方法：トリプトファンは、プロナゼに見られるタンパク質分解酵素の組み合わせで、製品マトリックスの無傷のタンパク質から放出されました。タンパク質溶解に続いて、トリプトファンは、逆相のアイソクラティックなHPLCおよび蛍光検出により定量化されました。調製されたサンプルを、メタノール/0.05 mリン酸緩衝液移動相を備えたC8 HPLCカラムに注入しました。結果：トリプトファンの全体では、再現性は平均2.1％相対SD（RSD）0.9〜3.6％RSDの範囲で、再現性は平均4.2％RSDで3.0〜9.9％RSDの範囲でした。結論：再現性の標準メソッドパフォーマンス要件（SMPRS®）が14マトリックスのうち13で満たされ、分析された14の製品マトリックスのうち11でSMPRが満たされました。
背景：AOAC First Action Method 2017.03、乳児用粉乳における総トリプトファンのHPLC測定、および酵素加水分解後の成人/小児栄養式のHPLC測定では、多層研究が完了しました。目的：7か国の10人の研究所が多層研究に参加しました。各検査室では、14人の乳児、小児、成人の栄養素を複製しました。分析された製品マトリックスには、牛乳、大豆、部分的に加水分解された牛乳、部分的に加水分解された大豆、元素ベースの乳児用粉砕剤、牛乳ベースの乳児処方飼育液（RTF）液体、成人の低脂肪粉末、成人の高脂肪および高タンパク質の既製栄養素が含まれていました。方法：トリプトファンは、プロナゼに見られるタンパク質分解酵素の組み合わせで、製品マトリックスの無傷のタンパク質から放出されました。タンパク質溶解に続いて、トリプトファンは、逆相のアイソクラティックなHPLCおよび蛍光検出により定量化されました。調製されたサンプルを、メタノール/0.05 mリン酸緩衝液移動相を備えたC8 HPLCカラムに注入しました。結果：トリプトファンの全体では、再現性は平均2.1％相対SD（RSD）0.9〜3.6％RSDの範囲で、再現性は平均4.2％RSDで3.0〜9.9％RSDの範囲でした。結論：再現性の標準メソッドパフォーマンス要件（SMPRS®）が14マトリックスのうち13で満たされ、分析された14の製品マトリックスのうち11でSMPRが満たされました。
Background: A multi-laboratory study was completed with AOAC First Action Method 2017.03, HPLC Determination of Total Tryptophan in Infant Formula and Adult/Pediatric Nutritional Formula Following Enzymatic Hydrolysis. Objective: Ten laboratories from seven countries participated in the multi-laboratory study. Each laboratory analyzed 14 infant, pediatric, and adult nutritionals in duplicate. Product matrices analyzed included milk, soy, partially hydrolyzed milk, partially hydrolyzed soy, and elemental-based infant formula powders, milk-based infant formula ready-to-feed (RTF) liquids, adult low-fat powders, and adult high-fat and high-protein ready-to-drink nutritionals. Methods: Tryptophan was released from the intact protein in product matrices with a combination of proteolytic enzymes found in pronase. Following proteolysis, tryptophan was quantitated by reverse-phase isocratic HPLC and fluorescence detection. Prepared samples were injected onto a C8 HPLC column with a methanol/0.05 M phosphate buffer mobile phase. Results: Overall for tryptophan, repeatability averaged 2.1% relative SD (RSD) with a range of 0.9-3.6% RSD, and reproducibility averaged 4.2% RSD with a range of 3.0-9.9% RSD. Conclusions: Repeatability Standard Method Performance Requirements (SMPRs®) were met for 13 of the 14 matrices and reproducibility SMPRs were met for 11 of the 14 product matrices analyzed.
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