マイクロRNA ‑ 145‑5pの上昇は、関節リウマチの核因子κ経路を活性化することにより、マトリックスメタロプロテイナーゼ‑ 9を増加させます。

本研究では、miR ‑ 145‑5pがマトリックスメタロプロテイナーゼ（MMP）の発現を調節することにより、関節リウマチ（RA）の発生と進行を悪化させることができるかどうかを調査しました。ELISAS、逆転写定量化ポリメラーゼ連鎖反応（RT -QPCR）、およびウエスタンブロッティングを使用して、線維芽細胞様滑膜球（FLS）におけるMMP ‑ 1、MMP ‑ 3、MMP ‑ 9、およびMMP ‑ 13の発現レベルを調べました。RA患者から。MMP ‑ 1、MMP ‑ 3、MMP ‑ 9、およびMMP ‑ 13のレベルは、RT -QPCRおよび免疫組織化学（IHC）分析により、マウスコラーゲン誘発関節炎（CIA）モデルの右後部足首で評価されました。MMPに対する核因子κ（NF ‑κB）経路の活性化または阻害の効果は、RT -QPCRおよびウエスタンブロッティングによって評価されました。NF ‑κBP65の細胞内局在は、共焦点顕微鏡により視覚化されました。miR ‑ 145‑5pの過剰発現により、RA ‑ FLSにおけるMMP ‑ 3、MMP ‑ 9、およびMMP ‑ 13の発現が増加しました。さらに、RT -QPCRおよびIHC分析で示されているように、miR ‑ 145‑5pアゴミールのマウスへの注入は、MMP ‑ 3、MMP ‑ 9、およびMMP ‑ 13を増加させました。NF ‑κB（BAY11‑7082）を選択的に標的とする化学阻害剤は、MMP ‑ 9発現を有意に減衰させましたが、MMP ‑ 3およびMMP ‑ 13のレベルには影響しませんでした。免疫蛍光分析により、p65の核局在が大幅に増強されたことが明らかになり、miR ‑ 145‑5pがp65核移行を促進することによりNF ‑κB経路の活性化を促進することを示しています。miR145‑5pの過剰発現もリン酸化P65レベルを有意に増加させました。ただし、IKB ‑ Aのレベルは、このmiRNAに応答して減少しました。さらに、我々の結果は、MMP ‑ 9の分泌を強化するNF ‑κB経路を活性化することにより、miR ‑ 145‑5pがRAの進行を悪化させたことを示しました。結論として、miR145‑5p発現の変調は、NF ‑κB経路の阻害を通じて、MMP、特にMMP ‑ 9の発現を調節することにより、RA炎症の治療に潜在的に有用です。

The present study explored whether miR‑145‑5p can aggravate the development and progression of rheumatoid arthritis (RA) by regulating the expression of matrix metalloproteinases (MMPs). ELISAs, reverse transcription‑quantitative polymerase chain reaction (RT‑qPCR), and western blotting were used to examine the expression levels of MMP‑1, MMP‑3, MMP‑9, and MMP‑13 in fibroblast‑like synoviocytes (FLS) from patients with RA. Levels of MMP‑1, MMP‑3, MMP‑9, and MMP‑13 were assessed in the right hind ankles of a murine collagen‑induced arthritis (CIA) model by RT‑qPCR and immunohistochemical (IHC) analysis. The effects of activation or inhibition of the nuclear factor‑κB (NF‑κB) pathway on MMPs were evaluated by RT‑qPCR and western blotting. Subcellular localization of NF‑κB p65 was visualized by confocal microscopy. Overexpression of miR‑145‑5p increased the expression of MMP‑3, MMP‑9, and MMP‑13 in RA‑FLS. Moreover, injection of a miR‑145‑5p agomir into mice increased MMP‑3, MMP‑9, and MMP‑13, as demonstrated by RT‑qPCR and IHC analysis. A chemical inhibitor that selectively targets NF‑κB (BAY11‑7082) significantly attenuated MMP‑9 expression, while it did not influence the levels of MMP‑3 and MMP‑13. Immunofluorescence analysis revealed that nuclear localization of p65 was significantly enhanced, indicating that miR‑145‑5p enhances activation of the NF‑κB pathway by promoting p65 nuclear translocation. miR‑145‑5p overexpression also significantly increased phosphorylated p65 levels; however, the levels of IkB‑a were reduced in response to this miRNA. Moreover, our results indicated that miR‑145‑5p aggravated RA progression by activating the NF‑κB pathway, which enhanced secretion of MMP‑9. In conclusion, modulation of miR‑145‑5p expression is potentially useful for the treatment of RA inflammation, by regulating the expression of MMPs, and MMP‑9 in particular, through inhibition of the NF‑κB pathway.