9-フルオレニルメトキシカルボニル（FMOC-CL）誘導体化を使用したHPLC/エレクトロスプレーの負のタンデム質量分析による微小組織量の敏感および選択的アミノ酸プロファイリング

アミノ酸を選択的かつ高感度に定量する方法について説明します。9-フルオレニルメトキシカルボニルクロリド (Fmoc-Cl) による二級アミノ基と一級アミノ基の確立された誘導体化手順と、その後の複数の反応モニタリングを使用した LC-ESI-MS/MS による誘導体化アミノ酸の検出の組み合わせにより、高い選択性が得られます。非極性部分の結合により、単一の固相抽出ステップによるマトリックスからの誘導体化アミノ酸の精製が可能になり、LC-ESI-MS/MS 検出中のイオン抑制が低減されて感度が向上します。さらに、すべてのアミノ酸のクロマトグラフィーは、シグナル対ノイズ比の大幅な低下を引き起こすことが知られている添加剤を含まない溶離液を使用する逆相 HPLC カラムで実行できます。この方法は、1 日あたり約 50 ～ 100 サンプルのサンプル処理量で、さまざまな起源の少量の液体および組織のアミノ酸プロファイリングに日常的に適用されています。方法の詳細な説明に加えて、いくつかの代表的な例が示されています。

A method for selective and sensitive quantification of amino acids is described. The combination of established derivatization procedures of secondary and primary amino groups with 9-fluorenylmethoxycarbonyl chloride (Fmoc-Cl) and subsequent detection of derivatized amino acids by LC-ESI-MS/MS using multiple reaction monitoring provides high selectivity. The attachment of an apolar moiety enables purification of derivatized amino acids from matrix by a single solid-phase extraction step, which increases sensitivity by reduced ion suppression during LC-ESI-MS/MS detection. Additionally, chromatography of all amino acids can be performed on reversed-phase HPLC columns using eluents without additives, which are known to cause significant decreases in signal to noise ratios. The method has been routinely applied for amino acid profiling of low amounts of liquids and tissues of various origins with a sample throughput of about 50-100 samples a day. In addition to a detailed description of the method, some representative examples are presented.