ナトリウム付加物のHPLC-ESI-MS/MS分析による脂肪酸酸化生成物のレジオイソマー非依存性定量化

細胞シグナル伝達分子としての酸化脂肪酸（OXFA）の役割の認識が高まっているにもかかわらず、および疾患の病因において、生物学的サンプルでこれらの種を測定する方法を開発することは挑戦的であることが証明されています。ここでは、HPLC-ESI-MS/MSを利用して、時間のかかるサンプル調製または誘導体化を必要とせずに、複数のフルレングスOxFA種をレジオイソマーに依存しない方法で識別および定量化する新しい方法について説明します。MS/MSによるFAとその酸化生成物の特性評価における最近の進歩に基づいて、私たちは、ヒドロペルオキシド、ヒドロキシド、ケトンの酸化の存在を明確に検証するために、微分エネルギー資格のあるイオンモニタリングと組み合わせてナトリウム付加物を測定することにより、陽性イオンイオン化を採用しました。リノール酸およびアラキドン酸の生成物。私たちのHPLC法は、これらの酸化された種の分離を、酸化化されていないカウンターパートから分離しながら、レジオイソマーに依存しない溶出を維持し、0.1ピコモルの定量化の下限で5 log10範囲にわたって定量化を可能にしました。単純なサンプルの準備と11分の低いランタイムにより、私たちの方法では、生物学的サンプル中のフルレングスOXFAの迅速で容易な検出と測定が可能になります。このアプローチにより、代謝疾患におけるOXFAの役割に関する新しい洞察とさらなる調査が可能になると考えています。

Despite growing acknowledgement of the role of oxidized fatty acids (oxFA) as cellular signaling molecules and in the pathogenesis of disease, developing methods to measure these species in biological samples has proven challenging. Here we describe a novel method utilizing HPLC-ESI-MS/MS to identify and quantify multiple full-length oxFA species in a regioisomer-independent manner without the need for time-consuming sample preparation or derivatization. Building on recent progress in the characterization of FA and their oxidation products by MS/MS, we employed positive-ion ionization by measuring sodium adducts in conjunction with Differential Energy Qualifier Ion Monitoring to unequivocally verify the presence of the hydroperoxide, hydroxide, and ketone oxidation products of linoleic and arachidonic acid. Our HPLC method achieved separation of these oxidized species from their unoxidized counterparts while maintaining regioisomer-independent elution, allowing quantification over a 5 log10 range with a lower limit of quantification of 0.1 picomoles. With a simple sample preparation and a runtime as low as 11 minutes, our method allows the rapid and facile detection and measurement of full-length oxFA in biological samples. We believe this approach will allow for new insight and further investigation into the role of oxFA in metabolic disease.