低PHペプチドマッピングを使用した部位固有のサッチミドおよび脱アミド化の定量のための自動化された適格なプラットフォーム方法

MABは、アスパラギンの脱アミド化またはアスパラギン酸の異性化からのコキシミドの形成を含む、いくつかの翻訳後修飾を受けます。マブの生物活性に対するコシニミド層の潜在的な影響のため、この種の検出と定量化は、製薬業界にとって重要な関心分野です。ただし、サッチミドの安定性を評価する研究は限られており、コキシミドを監視するために開発された方法は、製品固有または堅牢ではありません。ここでは、低PH耐性LYS-Cと修飾トリプシンの組み合わせを使用して、コキシミドの安定性を維持し、分離アッセイアーティファクトを排除し、従来のトレプシティックに相当する効率的なMAB消化を達成するためのプラットフォーム低PHペプチドマッピング法の開発を報告します。アルカリ性条件下でのペプチドマッピング方法。この方法を使用して、血清のコキシミドの安定性をin vitro研究で正確に評価し、半減期は1。5日であると判断されました。患者がサッキシミド中間体に曝露する可能性があるため、部位特異的な脱アミド化とコキシミド中間体を測定するための信頼できる方法が開発されました。単一の四重極質量検出器と相まって、私たちの方法は消化からデータ処理まで自動化され、優れた製造慣行環境で適用されました。この方法は、精度、精度、直線性、堅牢性を実証するために完全に適格でした。

mAbs undergo several post-translational modifications, including the formation of succinimide from the deamidation of asparagine or the isomerization of aspartic acid. Because of the potential impact of succinimide formation on the biological activity of mAbs, detection and quantification of this species is a key area of interest for the pharmaceutical industry. However, studies assessing succinimide stability have been limited, and methods developed to monitor succinimide are either product specific or not robust. Here, we report the development of a platform low-pH peptide-mapping method using a combination of low-pH-resistant Lys-C and modified trypsin to maintain succinimide stability, eliminate deamidation assay artifact, and achieve efficient mAb digestion equivalent to conventional tryptic peptide-mapping method under alkaline condition. Using this method, succinimide stability in serum was accurately assessed in vitro study and the half-life was determined to be 1.5 days. With potential patient exposure to succinimide intermediate, a reliable method was developed to measure site-specific deamidation and succinimide intermediate. Coupled with a single quadrupole mass detector, our method was automated from digestion to data processing and applicable in a good manufacturing practice environment. The method was fully qualified to demonstrate accuracy, precision, linearity, and robustness.