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植物ウイルスは、RNAサイレンシングサプレッサー（RSS）タンパク質を発現して、植物の防御メカニズムに対抗します。ここでは、AMVレプカーゼ（P12植物）のP1およびP2サブユニットを発現するアルファルファモザイクウイルス（AMV）RNA 3発現ベクターとトランスジェニックニコチアナタバカム植物に基づいてRSS活性を評価する方法について説明します。RSS能力が異なる異なるHC-PRO変異体を発現する異なるAMV RNA 3コンストラクトを持つp12植物の接種は、接種された葉とRSS活性に対する壊死病変間の完全な相関を明らかにしました。プロトプラスト分析により、RSS活性はAMV RNAの蓄積と相関することが示されました。3つのRSS活性アッセイとAMV-P12システムの直接的な比較により、カーネーションモットルウイルスのコートタンパク質がRSS活性を4つのアッセイで表示し、siRNAの蓄積を減少させることが明らかになりました。
植物ウイルスは、RNAサイレンシングサプレッサー（RSS）タンパク質を発現して、植物の防御メカニズムに対抗します。ここでは、AMVレプカーゼ（P12植物）のP1およびP2サブユニットを発現するアルファルファモザイクウイルス（AMV）RNA 3発現ベクターとトランスジェニックニコチアナタバカム植物に基づいてRSS活性を評価する方法について説明します。RSS能力が異なる異なるHC-PRO変異体を発現する異なるAMV RNA 3コンストラクトを持つp12植物の接種は、接種された葉とRSS活性に対する壊死病変間の完全な相関を明らかにしました。プロトプラスト分析により、RSS活性はAMV RNAの蓄積と相関することが示されました。3つのRSS活性アッセイとAMV-P12システムの直接的な比較により、カーネーションモットルウイルスのコートタンパク質がRSS活性を4つのアッセイで表示し、siRNAの蓄積を減少させることが明らかになりました。
Plant viruses express RNA silencing suppressor (RSS) proteins to counteract plant defence mechanisms. Here, we describe a method to assess the RSS activity based on an alfalfa mosaic virus (AMV) RNA 3 expression vector and transgenic Nicotiana tabacum plants that express the P1 and P2 subunits of the AMV replicase (P12 plants). Inoculation of P12 plants with different AMV RNA 3 constructs expressing different HC-Pro mutants that differ in their RSS capabilities, revealed a perfect correlation between necrotic lesions on inoculated leaves and RSS activity. Protoplast analysis showed that the RSS activity correlated with the accumulation of the AMV RNAs. A direct comparison between three RSS activity assays and the AMV-P12 system revealed that the coat protein of carnation mottle virus displays RSS activity with the four assays and reduced the accumulation of the siRNAs.
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