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Methods in molecular biology (Clifton, N.J.)20190101Vol.2031issue()

in vitroマウスリンパ腫細胞(L5178Y TK +/- -372C)前方突然変異アッセイ

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文献タイプ:
  • Journal Article
概要
Abstract

in vitroマウスリンパ腫細胞アッセイ(MLA)は、遺伝的毒物学で最も広く実践されているアッセイの1つです。MLAは、マウス胸腺リンパ腫に由来するL5178Y(TK +/- -3.7.2C)細胞株のチミジンキナーゼ(TK)遺伝子座で前方変異を検出します。このアッセイは、点突然変異、削除と多焦点、染色体再配置、有糸分裂組換えおよび非分離を含む幅広い遺伝的イベントを検出することができます。アッセイには2つの等しく受け入れられているバージョンがあります。1つはソフト寒天クローンを使用し、96マイクロウェルプレートに液体媒体クローニングを使用して2番目の方法を使用します。MLAで回収された2つの形態学的に異なるタイプの変異コロニーがあります。大小のコロニー変異体。小さなコロニー変異体の誘導は、総染色体異常を誘導する化学物質と関連していますが、大きな変異コロニーの誘導は一般に、点変異を誘導する化学物質に関連しています。細胞株の発生源と核型、ならびに培養条件は、アッセイの性能に影響を与える可能性のある重要な変数です。アッセイは、遺伝毒性テストに関する国際ワークショップ(IWGT)と経済協力と開発テストガイドラインの組織490で推奨されている基準に従って実行された場合、さまざまなクラスのさまざまなクラスの全体的な安全評価プロセスの一部として貴重な遺伝毒性ハザード情報を提供することができます。試験物質。

in vitroマウスリンパ腫細胞アッセイ(MLA)は、遺伝的毒物学で最も広く実践されているアッセイの1つです。MLAは、マウス胸腺リンパ腫に由来するL5178Y(TK +/- -3.7.2C)細胞株のチミジンキナーゼ(TK)遺伝子座で前方変異を検出します。このアッセイは、点突然変異、削除と多焦点、染色体再配置、有糸分裂組換えおよび非分離を含む幅広い遺伝的イベントを検出することができます。アッセイには2つの等しく受け入れられているバージョンがあります。1つはソフト寒天クローンを使用し、96マイクロウェルプレートに液体媒体クローニングを使用して2番目の方法を使用します。MLAで回収された2つの形態学的に異なるタイプの変異コロニーがあります。大小のコロニー変異体。小さなコロニー変異体の誘導は、総染色体異常を誘導する化学物質と関連していますが、大きな変異コロニーの誘導は一般に、点変異を誘導する化学物質に関連しています。細胞株の発生源と核型、ならびに培養条件は、アッセイの性能に影響を与える可能性のある重要な変数です。アッセイは、遺伝毒性テストに関する国際ワークショップ(IWGT)と経済協力と開発テストガイドラインの組織490で推奨されている基準に従って実行された場合、さまざまなクラスのさまざまなクラスの全体的な安全評価プロセスの一部として貴重な遺伝毒性ハザード情報を提供することができます。試験物質。

The in vitro mouse lymphoma cell assay (MLA) is one of the most widely practiced assays in genetic toxicology. MLA detects forward mutations at the thymidine kinase (Tk) locus of the L5178Y (Tk+/- -3.7.2C) cell line derived from a mouse thymic lymphoma. This assay is capable of detecting a wide range of genetic events including point mutations, deletions and multilocus, chromosomal rearrangements, mitotic recombination and nondisjunction. There are two equally accepted versions of the assay, one using soft agar cloning and the second method using liquid media cloning in 96-microwell plates. There are two morphologically distinct types of mutant colonies recovered in the MLA; small and large colony mutants. The induction of small colony mutants is associated with chemicals inducing gross chromosomal aberrations, whereas the induction of large mutant colonies is generally associated with chemicals inducing point mutations. The source and karyotype of the cell line as well as the culture conditions are important variables that could influence the assay performance. The assay when performed according to the standards recommended by the International Workshops on Genotoxicity Testing (IWGT) and the Organization of Economic Cooperation and Development Test Guideline 490 is capable of providing valuable genotoxicity hazard information as part of the overall safety assessment process of various classes of test substances.

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