ヒト血漿を使用した脂肪剤研究のための単相および二相抽出プロトコルの比較

プラズマの脂質プロファイリングは、主要な細胞経路における脂質の重要性を考えると、新たな分野であり、効率的な脂質抽出プロトコルに依存しています。認知症、神経精神医学的健康、疾患に関連する潜在的な診断および予後バイオマーカーを特定する手段として、最近の細胞リピドミクスに注目しています。いくつかの溶媒ベースの脂質抽出プロトコルが開発されており、現在使用されていますが、新規でより効率的な方法は、血漿および令状の調査における脂質分析を大幅に簡素化する可能性があります。正常脂肪流体の成人ボランティアからのヒト血漿を収集して、古典的なフォルチ法、メタノール/Tert-ブチルメチルエーテル（MTBE）（Matyash）法、および最近の単期メタノール/1-ブタノールを含む3つの異なる溶媒抽出プロトコルを評価しました。Alshehry）メソッド。抽出された脂質は、陽性および陰性イオンモードで液体クロマトグラフィー質量分析（LC-MS）を使用して分析されました。全体として、500を超える異なる脂質が陽性および負のイオンモードを組み合わせて同定されました。私たちのデータは、単相アルシェリー法は、ほとんどの脂質クラスの抽出においてFolchおよびMatyash法と同じくらい効果的であり、極脂質の抽出においてより効果的であったことを示しています。Alshehry法の正規化されたピーク領域は、FolchおよびMatyashメソッドの両方と高度かつ正の相関がありました（それぞれR 2 = 0.99と0.97）。被験者内および対象相関は、それぞれr = 0.99と0.96でした。陽性モードでのアッセイ内の変動係数（CV％）は、それぞれAlshehry、Folch、およびMatyashメソッドの14.1、15.1、および21.8でした。Alshehry Inter-Assay CVの中央値（5日間にわたって収集）は14.4％でした。結論として、新しいアルシェリー法は、少なくとも10μlの血漿を使用して、幅広い脂質クラスの検出において、確立された二相抽出方法よりも優れていても、少なくとも同じくらい良く、非常に再現性が高く、より安全で環境的でした。 - クロロホルムを必要としないので友好的です。

Lipidomic profiling of plasma is an emerging field, given the importance of lipids in major cellular pathways, and is dependent on efficient lipid extraction protocols. Recent attention has turned to plasma lipidomics as a means to identify potential diagnostic and prognostic biomarkers related to dementia, neuropsychiatric health and disease. Although several solvent-based lipid extraction protocols have been developed and are currently in use, novel and more efficient methods could greatly simplify lipid analysis in plasma and warrant investigation. Human plasma from normolipidemic adult volunteers was collected to evaluate three different solvent extraction protocols, including the classical Folch method, the methanol/tert-butyl methyl ether (MTBE) (Matyash) method, and a recent single-phase methanol/1-butanol (Alshehry) method. Extracted lipids were analyzed using liquid chromatography mass spectrometry (LC-MS) in positive and negative ion mode. Overall, more than 500 different lipids were identified in positive and negative ion mode combined. Our data show that the single phase Alshehry method was as effective as the Folch and Matyash methods in extracting most lipid classes and was more effective in extraction of polar lipids. Normalized peak areas of the Alshehry method were highly and positively correlated with both the Folch and Matyash methods (r 2 = 0.99 and 0.97, respectively). Within- and between- subject correlations were r = 0.99 and 0.96, respectively. Median intra-assay coefficient of variation (CV%) in positive mode was 14.1, 15.1, and 21.8 for the Alshehry, Folch and Matyash methods, respectively. Median Alshehry inter-assay CV (collected over 5 separate days) was 14.4%. In conclusion, the novel Alshehry method was at least as good as, if not better than the established biphasic extraction methods in detecting a wide range of lipid classes, using as little as 10 μL of plasma, and was highly reproducible, safer and more environmentally-friendly as it doesn't require chloroform.