PCRプライマー設計を成功させるためのパラメーター

プライマーは、PCRアッセイの重要なコンポーネントであり、それらはその特異性、感度、および堅牢性の主な決定要因であるためです。多数のガイドラインの公開にもかかわらず、多くの公開されたアッセイの実際の設計はしばしば不健全です。プライマーは主張された特異性を欠いているため、結合部位で二次構造と競合する必要がある場合があります。狭い温度範囲内。この章では、これらの最も一般的な問題を回避するための簡単なガイダンスを提供します。

Primers are critical components of any PCR assay, as they are the main determinants of its specificity, sensitivity, and robustness. Despite the publication of numerous guidelines, the actual design of many published assays is often unsound: primers lack the claimed specificity, they may have to compete with secondary structures at their binding sites, primer dimer formation may affect the assay's sensitivity or they may bind only within a narrow temperature range. This chapter provides simple guidance to avoid these most common issues.