人間のSVG-A細胞培養におけるトリプレットの繰り返し拡張の評価

トリヌクレオチドの繰り返し（TNR）の拡大に寄与する分子メカニズムを決定することは、ハンティントン病などの遺伝的に遺伝する疾患の起源を理解し、治療治療の開発における努力を知らせるために不可欠です。TNR拡張のメカニズムを調査するための1つのリソースとして、ヒト組織培養細胞の拡張アッセイについて説明します。ヒト星状細胞に由来する細胞株SVG-Aは、患者に由来する多くの細胞株とは異なり、培養の拡大をサポートする重要な特性を持っています。SVG-A細胞は、siRNA、CRISPR-CAS9、酵素阻害剤などの標準的な遺伝的および生化学的技術にも適しています。この機能の組み合わせにより、ここで説明されている定量的な遺伝的アッセイを使用して、読み出しとして使用して、TNR拡張の機構的研究が可能になります。SVG-Aアッセイは、拡張を駆動する重要なタンパク質を正しく同定し、潜在的な治療薬として拡張を抑制する酵素阻害剤の検査を促進しました。この章では、繰り返しの拡張が検出、視覚化、定量化される方法について説明します。

Determining the molecular mechanisms that contribute to trinucleotide repeat (TNR) expansions is essential to understanding the origin of genetically inherited diseases, such as Huntington's disease, and to inform efforts in developing therapeutic treatments. As one resource to probe the mechanisms of TNR expansions, we describe an expansion assay in human tissue culture cells. The cell line SVG-A, derived from human astrocytes, has the important property of supporting expansions in culture, unlike many cell lines derived from patients. SVG-A cells are also amenable to standard genetic and biochemical techniques such as siRNA, CRISPR-Cas9 and enzymatic inhibitors. This combination of features allows for mechanistic studies of TNR expansions, using the quantitative genetic assay described here as a readout. The SVG-A assay has correctly identified key proteins that drive expansions and it has facilitated testing of enzymatic inhibitors that suppress expansions as potential therapeutics. This chapter describes how repeat expansions are detected, visualized, and quantified.