SNAP-TAGテクノロジーを使用した1ステップの部位固有の抗体フラグメント自動配合

抗体ベースの診断および治療薬は、特にがん管理において医学において大きな役割を果たしています。さまざまな化学的、遺伝的および酵素部位特異的な共役法は、カスタマイズされた特性を持つ均一な抗体コンジュゲートを生成するために、エフェクター分子を備えた抗体を装備するために開発されています。ただし、これらの方法のほとんどは比較的複雑で高価であり、いくつかの反応手順が必要です。SNAPタグなどの自己研究タンパク質は、これらの課題に対処するための革新的なソリューションです。SNAP-TAGは、ヒトDNA修復酵素アルキルガニン-DNAアルキルトランスフェラーゼ（AGT）の修正バージョンであり、A（6） - ベンジルグアニン（BG）変調分子と特異的に反応し、アリキル基のアリキル基の不正確な移動を介して反応します。異なる合成小エフェクター分子を持つ抗体を標識するための、単純で制御された堅牢な部位固有の方法を提供します。SNAPタグを組換え抗体と融合することで、生理学的条件下とA 1：1のストイチオ測定とともに、酵素の活性部位におけるアルキル基の自己触媒、不可逆的な移動により、BG含有基質の効率的な共役が可能になります。このプロトコルは、さまざまなタイプのBG修飾エフェクター分子との部位特異的なSNAPタグシングルチェーン抗体フラグメント（SCFV）を生成する方法について説明します。SCFV-Photosentitizerコンジュゲートの設計と生産、および免疫皮膚症剤としての特性評価には、特定の例が含まれています。このプロトコルには、SCFV-SNAP-TAG融合タンパク質をコードするDNA配列が含まれ、結果として生じるSCFV-SNAP-TAGベースの免疫結合の発現、精製、およびテストのための戦略を概説します。すべての実験は、8週間の時間枠内で基本的な分子生物学スキルを持つ大学院レベルの研究者によって実行できます。

Antibody-based diagnostic and therapeutic agents play a substantial role in medicine, especially in cancer management. A variety of chemical, genetic and enzymatic site-specific conjugation methods have been developed for equipping antibodies with effector molecules to generate homogeneous antibody conjugates with tailored properties. However, most of these methods are relatively complicated and expensive and require several reaction steps. Self-labeling proteins such as the SNAP-tag are an innovative solution for addressing these challenges. The SNAP-tag is a modified version of the human DNA repair enzyme alkylguanine-DNA alkyltransferase (AGT), which reacts specifically with O(6)-benzylguanine (BG)-modified molecules via irreversible transfer of an alkyl group to a cysteine residue. It provides a simple, controlled and robust site-specific method for labeling antibodies with different synthetic small effector molecules. Fusing a SNAP-tag to recombinant antibodies allows efficient conjugation of BG-containing substrates by autocatalytic, irreversible transfer of the alkyl group to a cysteine residue in the enzyme's active site under physiological conditions and with a 1:1 stoichiometry. This protocol describes how to generate site-specific SNAP-tag single-chain antibody fragment (scFv) conjugates with different types of BG-modified effector molecules. A specific example is included for the design and production of an scFv-photosensitizer conjugate and its characterization as an immuno-theranostic agent. This protocol includes DNA sequences encoding scFV-SNAP-tag fusion proteins and outlines strategies for expression, purification and testing of the resulting scFv-SNAP-tag-based immuno-conjugates. All experiments can be performed by a graduate-level researcher with basic molecular biology skills within an 8-week time frame.