酵母細胞表面の化学修飾により、フルレングス抗体の表示と可溶性分泌の間のスイッチが可能になります

古典的な酵母表面表示（YSD）ベースの抗体ヒット発見は、蛍光活性化細胞選別（FACS）による大型抗体フラグメントライブラリーの候補の濃縮に依存し、残りの多様性のシーケンスが続きます。次に、ヒット候補のシーケンスはプラスミドに移され、哺乳類細胞での全長IgGとしての発現を可能にします。生産および下流の処理後、抗体は生化学的および機能的アッセイでさらに資格があります。この多段階プロセスは、学界で成功することが証明されており、バイオ医薬品産業への道も見られました。しかし、最近の10年間で、いくつかのグループは、酵母細胞による抗体または抗体断片の切り替えまたは同時分泌と表示のいずれかを有効にすることにより、このプロセスを簡素化しようとしました。したがって、候補者の機能的テストは、スクリーニングプロセス中にすぐに達成でき、退屈なシーケンスの再構成と生産ホストの変更の必要性を排除できます。このプロトコルでは、酵母細胞に全長の抗体ディスプレイシステムを確立するためのガイダンスを提供します。これにより、可溶性抗体分泌への単純なスイッチが可能になります。

The classical yeast surface display (YSD)-based antibody hit discovery relies on the enrichment of candidates from large antibody fragment libraries by fluorescence-activated cell sorting (FACS), followed by sequencing of the remaining diversity. The sequences of hit candidates are then transferred into plasmids, which allow their expression as full-length IgG in mammalian cells. After production and downstream processing, antibodies are further qualified in biochemical and functional assays. This multistep process has been proven to be successful in academia and has also found its way to the biopharmaceutical industry. However, during the recent decade, several groups tried to simplify this process by enabling either switchable or simultaneous secretion and display of antibodies or antibody fragments by yeast cells. Therefore, functional testing of candidates can be accomplished immediately during the screening process, while eliminating the need for tedious sequence reformatting and production host change. In this protocol, we give guidance for the establishment of a full-length antibody display system on yeast cells, which permits a simple switch to soluble antibody secretion.