生物発光共鳴エネルギー伝達アッセイと蛍光顕微鏡のための蛍光プリノセプター拮抗薬の適用

蛍光拮抗薬は、Gタンパク質共役受容体の薬理学を尋問する能力を提供します。共鳴エネルギー伝達技術により、蛍光拮抗薬を実装して、放射標識プローブ用に設計されたアッセイを使用して受容体リガンド相互作用を監視できます。これらのアンタゴニストの蛍光性は、生細胞で受容体の局在と分布を視覚化することも可能にします。ここでは、P1アデノシンA3受容体を例として使用して、ナノールックルシフェラーゼまたはSNAPタグを使用した修飾プリン受容体の生成について説明します。また、リガンドを介した生物発光共鳴エネルギー伝達アッセイと共焦点顕微鏡を使用して、新しい蛍光プリン作動性拮抗薬を特徴付ける手順についても説明します。

Fluorescent antagonists offer the ability to interrogate G protein-coupled receptor pharmacology. With resonance energy transfer techniques, fluorescent antagonists can be implemented to monitor receptor-ligand interactions using assays originally designed for radiolabeled probes. The fluorescent nature of these antagonists also enables the localization and distribution of the receptors to be visualized in living cells. Here, we describe the generation of modified purinergic receptors with the NanoLuc luciferase or SNAP-tag, using the P1 adenosine A3 receptor as an example. We also describe the procedure of characterizing a novel fluorescent purinergic antagonist using ligand-mediated bioluminescence resonance energy transfer assays and confocal microscopy.