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CREリコンビナーゼは、in vitroおよびin vivo研究の両方のDNA配列を操作するために広く使用されています。CREへの転写（TAT）配列のトランスアクチベーターの付着により、TATCREは細胞膜に浸透することができ、核局在信号（NLS）の添加により、酵素が核に移行するのに役立ちます。組換えTAT-CREの収量は包含体の形成によって制限されるため、積極的に帯電したアルギニンが豊富なTAT配列が包含体の形成を引き起こすのに対し、負に帯電した配列の添加により中和がタンパク質の溶解度を改善することを仮定しました。これを証明するために、負に帯電したポリグルタミン酸（E12）シーケンスを近位に付着させることにより、積極的に帯電したTATシーケンスを中和しました。E12タグは、大腸菌で発現した場合、TAT-NLS-CRE（TATCRE）の溶解度とE12-TAT-NLS-CRE（E12-TAT-CRE）の溶解度と収率を改善することがわかりました。さらに、E12-TAT-CREを発現する細胞の成長は、Tat-CREを発現する細胞の成長と比較して増加しました。精製されたTATCREの有効性は、細胞のないシステムおよび293 FT細胞のフロックス化されたプラスミドでの組換え試験によって確認されました。まとめると、我々の結果は、TAT-CREへのE12シーケンスの付着により、大腸菌での発現中の溶解度（おそらくTAT配列のイオン電荷効果を中和することにより）を改善し、結果として収量を増加させることを示唆しています。この方法は、研究および治療目的のために透過性タンパク質の生産に適用できます。
CREリコンビナーゼは、in vitroおよびin vivo研究の両方のDNA配列を操作するために広く使用されています。CREへの転写（TAT）配列のトランスアクチベーターの付着により、TATCREは細胞膜に浸透することができ、核局在信号（NLS）の添加により、酵素が核に移行するのに役立ちます。組換えTAT-CREの収量は包含体の形成によって制限されるため、積極的に帯電したアルギニンが豊富なTAT配列が包含体の形成を引き起こすのに対し、負に帯電した配列の添加により中和がタンパク質の溶解度を改善することを仮定しました。これを証明するために、負に帯電したポリグルタミン酸（E12）シーケンスを近位に付着させることにより、積極的に帯電したTATシーケンスを中和しました。E12タグは、大腸菌で発現した場合、TAT-NLS-CRE（TATCRE）の溶解度とE12-TAT-NLS-CRE（E12-TAT-CRE）の溶解度と収率を改善することがわかりました。さらに、E12-TAT-CREを発現する細胞の成長は、Tat-CREを発現する細胞の成長と比較して増加しました。精製されたTATCREの有効性は、細胞のないシステムおよび293 FT細胞のフロックス化されたプラスミドでの組換え試験によって確認されました。まとめると、我々の結果は、TAT-CREへのE12シーケンスの付着により、大腸菌での発現中の溶解度（おそらくTAT配列のイオン電荷効果を中和することにより）を改善し、結果として収量を増加させることを示唆しています。この方法は、研究および治療目的のために透過性タンパク質の生産に適用できます。
Cre recombinase is widely used to manipulate DNA sequences for both in vitro and in vivo research. Attachment of a trans-activator of transcription (TAT) sequence to Cre allows TATCre to penetrate the cell membrane, and the addition of a nuclear localization signal (NLS) helps the enzyme to translocate into the nucleus. Since the yield of recombinant TAT-Cre is limited by formation of inclusion bodies, we hypothesized that the positively charged arginine-rich TAT sequence causes the inclusion body formation, whereas its neutralization by the addition of a negatively charged sequence improves solubility of the protein. To prove this, we neutralized the positively charged TAT sequence by proximally attaching a negatively charged poly-glutamate (E12) sequence. We found that the E12 tag improved the solubility and yield of E12-TAT-NLS-Cre (E12-TAT-Cre) compared with those of TAT-NLS-Cre (TATCre) when expressed in E. coli. Furthermore, the growth of cells expressing E12-TAT-Cre was increased compared with that of the cells expressing TAT-Cre. Efficacy of the purified TATCre was confirmed by a recombination test on a floxed plasmid in a cell-free system and 293 FT cells. Taken together, our results suggest that attachment of the E12 sequence to TAT-Cre improves its solubility during expression in E. coli (possibly by neutralizing the ionic-charge effects of the TAT sequence) and consequently increases the yield. This method can be applied to the production of transducible proteins for research and therapeutic purposes.
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