CPG含有骨格を持つ従来のプラスミドDNASは、マウス肝臓で耐久性のある導入遺伝子発現を達成します

背景：プラスミドDNAからの耐久性のある導入遺伝子発現は、非ウイルスベクターを使用した遺伝子療法の鍵です。プラスミドDNAからの導入遺伝子発現の耐久性とCPGフリーおよび含有バックボーンとの比較が重要です。 方法：CPGを含む骨格、CPGの有無にかかわらずさまざまな転写調節シーケンス、および明らかに非免疫原性であるGaussia PrincePS Luciferaseをコードする遺伝子を使用してプラスミドDNAを構築しました。尾静脈の流体力学ベースの方法は、マウスへのプラスミド注入に使用され、血清中のルシフェラーゼ活性は28日間追跡されました。 結果：アルブミンプロモーター[サイトメガロウイルス（CMV）エンハンサーの有無にかかわらず]アルブミンプロモーターを含むプラスミドDNAおよび伸長因子（EF）1αプロモーターとCMVエンハンサーは、長期のルシフェラーゼ発現を示しました。CMVエンハンサーなしでアルブミンプロモーターを含むプラスミドDNAからの発現は、少なくとも24週間維持され、対応するCPGフリープラスミドDNAの発現と同様でした。 結論：本研究で得られた結果は、適切な転写調節シーケンスが使用されている場合、プラスミドDNAからの耐久性のある導入遺伝子発現に対して特別な配列/システムが不要であることを示唆しています。

BACKGROUND: Durable transgene expression from plasmid DNAs is the key to gene therapy with non-viral vectors. A comparison of the durability of transgene expression from plasmid DNAs with the CpG-free and -containing backbones is important. METHODS: We constructed plasmid DNAs with the CpG-containing backbone, various transcription regulatory sequences with and without CpG, and the gene encoding Gaussia princeps luciferase, which is apparently non-immunogenic. The tail vein hydrodynamics-based method was used for plasmid injection into mice, and the luciferase activity in serum was tracked for 28 days. RESULTS: The plasmid DNAs containing the albumin promoter [with or without the cytomegalovirus (CMV) enhancer] and the elongation factor (EF)1α promoter plus the CMV enhancer exhibited long-term luciferase expression. The expression from the plasmid DNA containing the albumin promoter without the CMV enhancer was maintained for at least 24 weeks and was similar to that from the corresponding CpG-free plasmid DNA. CONCLUSIONS: The results obtained in the present study suggest that special sequences/systems are unnecessary for durable transgene expression from plasmid DNAs when the proper transcription regulatory sequences are used.