ヒトエンドヌクレアーゼV mRNAの複雑な代替スプライシングですが、単一のタンパク質アイソフォームのみの証拠

エンドヌクレアーゼV（ENDOV）は、アデノシンの脱アミノ化産物であるイノシンに親和性を持つリボヌクレアーゼです。ヒトを含むほとんどの生物のゲノムは、Endovホモログをエンコードしますが、in vivo機能と遺伝子調節に関する知識はまばらです。この分野で貢献するために、ヒトENDOV（ヘンドフ）のmRNAとタンパク質発現を分析しました。パブリックシーケンスデータベースの分析により、広範な代替スプライシングを示唆する多数のヘンドフ転写産物のバリエーションが明らかになりました。転写産物の多くには、Endov Coreドメインの保存された領域に対応する1つ以上のエクソンが欠けており、これらの転写産物が活性タンパク質についてエンコードしないことを示唆しています。それぞれ282、308、および309アミノ酸をコードするオープンリーディングフレームで3つの完全な転写産物が見つかりました。組換えヘンドフ308とヘンドフ309は、ヘンドフの以前の研究で使用されたバリアントであるヘンドフ282と同じ切断活動を共有しています。ただし、Hendov 309は、他のアイソフォームよりも強い親和性でイノシン含有RNAに結合します。ヘンドフ282について以前に報告されたように、ヒト細胞の細胞質、核小体およびヒマイヤ誘発ストレス顆粒で過剰発現したGFP融合アイソフォームが見つかりました。原発性細胞ではなく不死化細胞株の転写産物は、細胞がヘンドフmRNA発現を調節することを示唆しています。3つのフルレングス転写産物すべてが存在しているにもかかわらず、質量分析分析により、ヘンドフ309アイソフォームのみに対応するペプチドが特定されました。この結果は、ヒトENDOVのさらなる研究がヘンドフ309アイソフォームをむしろ包含すべきであることを示唆しています。

Endonuclease V (ENDOV) is a ribonuclease with affinity for inosine which is the deamination product of adenosine. The genomes of most organisms, including human, encode ENDOV homologs, yet knowledge about in vivo functions and gene regulation is sparse. To contribute in this field, we analyzed mRNA and protein expression of human ENDOV (hENDOV). Analyses of public sequence databases revealed numerous hENDOV transcript variants suggesting extensive alternative splicing. Many of the transcripts lacked one or more exons corresponding to conserved regions of the ENDOV core domain, suggesting that these transcripts do not encode for active proteins. Three complete transcripts were found with open reading frames encoding 282, 308 and 309 amino acids, respectively. Recombinant hENDOV 308 and hENDOV 309 share the same cleavage activity as hENDOV 282 which is the variant that has been used in previous studies of hENDOV. However, hENDOV 309 binds inosine-containing RNA with stronger affinity than the other isoforms. Overexpressed GFP-fused isoforms were found in cytoplasm, nucleoli and arsenite induced stress granules in human cells as previously reported for hENDOV 282. RT-qPCR analysis of the 3'-termini showed that hENDOV 308 and hENDOV 309 transcripts are more abundant than hENDOV 282 transcripts in immortalized cell lines, but not in primary cells, suggesting that cells regulate hENDOV mRNA expression. In spite of the presence of all three full-length transcripts, mass spectrometry analyses identified peptides corresponding to the hENDOV 309 isoform only. This result suggests that further studies of human ENDOV should rather encompass the hENDOV 309 isoform.