末梢血のマルチパラメトリックフローサイトメトリー分析Epstein-barrウイルス感染および非感染亜集団の間の違い

目的：エプスタインバーウイルス（EBV）は主にB細胞を標的とし、これらの細胞は新しい表現型特性を獲得することができます。ここでは、健康な被験者からのEBV感染および感染していないB細胞が、支配的な表現型、成熟段階、およびホーミング受容体の発現の割合が異なるかどうかを分析しました。 方法：EBV感染および感染した細胞は、フルオロフォア標識EBV RNA特異的DNAプローブと、フルオロフォア標識抗体と表面系統、ケモカイン受容体、および免疫グロブリンアイソ型を含むフルオロフォア標識抗体と組み合わせたフローサイトメトリーによって同定されました。 結果：我々の結果は、Eberpos B細胞の人身売買特性がEberneg B細胞とは異なり、α4β1およびα4β7およびCCR5およびCCR7で最も支配的な違いが検出されたことを示しています。EBV陽性細胞は、主にメモリIgM+ B細胞またはIgA以下のIgA以下のプラスマブラスト/血漿細胞（PB/PC）が陽性です。感染していないB細胞と比較して、EBV陽性B細胞が少ないα4β7を発現し、α4β1を発現する細胞はほとんどありません。EBV陽性B細胞は、EBV陰性細胞と比較して、CCR5+およびCCR7+細胞の有意に高い割合を含んでいた。血中単核細胞の炎症誘発性サイトカインIL-6へのin vitro曝露は、EBV陽性B細胞の集団を減少させます。 結論：EBVに感染したB細胞はわずかな亜集団のみを表していますが、それらの非定型機能は、いくつかの自己免疫疾患や腫瘍などの発達異常に素因となる人に寄与する可能性があります。マルチパラメーターフローサイトメトリーを使用して、さまざまな成熟段階のEBV陽性および陰性B細胞の移動の違いと、胃腸および呼吸管の粘膜組織に対する特に異なる標的の産生抗体のアイソタイプの違いを特徴づけました。

AIMS: Epstein-Barr virus (EBV) targets predominantly B cells and these cells could acquire new phenotype characteristics. Here we analyzed whether EBV-infected and -uninfected B cells from healthy subjects differ in proportion of dominant phenotypes, maturation stage, and homing receptors expression. METHODS: EBV-infected and -uninfected cells were identified by flow cytometry using fluorophore-labeled EBV RNA-specific DNA probes combined with fluorophore-labeled antibody to surface lineage markers, integrins, chemokine receptors, and immunoglobulin isotypes, including intracellular ones. RESULTS: Our results show that the trafficking characteristics of EBERpos B cells are distinct from EBERneg B cells with most dominant differences detected for α4β1 and α4β7 and CCR5 and CCR7. EBV-positive cells are predominantly memory IgM+ B cells or plasmablasts/plasma cells (PB/PC) positive for IgA or less for IgM. In comparison to uninfected B cells, less EBV-positive B cells express α4β7 and almost no cells express α4β1. EBV-positive B cells contained significantly higher proportion of CCR5+ and CCR7+ cells in comparison to EBV-negative cells. In vitro exposure of blood mononuclear cells to pro-inflammatory cytokine IL-6 reduces population of EBV-positive B cell. CONCLUSION: Although EBV-infected B cells represent only a minor subpopulation, their atypical functions could contribute in predisposed person to development abnormities such as some autoimmune diseases or tumors. Using multi-parameter flow cytometry we characterized differences in migration of EBV-positive and -negative B cells of various maturation stage and isotype of produced antibodies particularly different targeting to mucosal tissues of gastrointestinal and respiratory tracts.