ヒト人工染色体とCHO細胞への染色体移動に関する遺伝子増幅を介した効率的なタンパク質生産システム

遺伝子増幅方法は、高レベルの組換えタンパク質を産生する細胞の確立に重要な役割を果たします。しかし、そのような細胞株の安定性と生成される組換えタンパク質のレベルは、引き続き最適です。ここでは、ヒト人工染色体（HAC）ベクターと開始領域（IR）/マトリックスアタッチメント領域（MAR）遺伝子増幅法の組み合わせを使用して、高レベルの組換えタンパク質を生成する安定した細胞を確立しました。強化された緑色蛍光タンパク質（EGFP）の増幅は、CHO DG44細胞のEGFP遺伝子とIR/MAR配列（EGFP MAR-HAC）を運ぶHACで誘導されました。EGFPの発現レベルは、IR/MARシーケンスのない元のHACと比較して約6倍増加しました。さらに、HAC（VEGF MAR-HAC）の抗血管内皮成長因子（VEGF）抗体もこのIR/MAR-HACシステムの利用により増幅され、抗VEGF抗体レベルはレベルと比較して約2倍高かったIR/MARのないコントロールセルで。さらに、CHO-K1細胞におけるVEGF MAR-HACによる抗VEGF抗体の発現は、CHO DG44細胞の発現と比較して2.3倍増加しました。総合すると、IR/MAR-HACシステムは、HACベクターの関心のある遺伝子の増幅を促進し、哺乳類細胞から安定してタンパク質を生成する新しい細胞株を確立するために使用できます。

Gene amplification methods play a crucial role in establishment of cells that produce high levels of recombinant protein. However, the stability of such cell lines and the level of recombinant protein produced continue to be suboptimal. Here, we used a combination of a human artificial chromosome (HAC) vector and initiation region (IR)/matrix attachment region (MAR) gene amplification method to establish stable cells that produce high levels of recombinant protein. Amplification of Enhanced green fluorescent protein (EGFP) was induced on a HAC carrying EGFP gene and IR/MAR sequences (EGFP MAR-HAC) in CHO DG44 cells. The expression level of EGFP increased approximately 6-fold compared to the original HAC without IR/MAR sequences. Additionally, anti-vascular endothelial growth factor (VEGF) antibody on a HAC (VEGF MAR-HAC) was also amplified by utilization of this IR/MAR-HAC system, and anti-VEGF antibody levels were approximately 2-fold higher compared with levels in control cells without IR/MAR. Furthermore, the expression of anti-VEGF antibody with VEGF MAR-HAC in CHO-K1 cells increased 2.3-fold compared with that of CHO DG44 cells. Taken together, the IR/MAR-HAC system facilitated amplification of a gene of interest on the HAC vector, and could be used to establish a novel cell line that stably produced protein from mammalian cells.