HEMA 3染色：筋芽細胞の分化の評価のための簡単な代替

骨格筋組織の再生には、静止衛星細胞の活性化、増殖、および分化が必要です。衛星細胞の再生能力は、低血清条件（2％から5％）で区別して多核筋管を形成することにより、in vitroで研究できます。筋管は固定されて染色され、分化の指標が定量化されます。JennerとGiemsaの染色は、通常、筋管染色に使用されます。ただし、この染色プロセスは、染色pH、染色時間、染色の調製以来の時間などの要因に応じて変動する場合があります。この記事には、筋芽細胞の分離、増殖、およびin vitroでの分化のためのプロトコルが含まれています。Jenner-Giemsa染色;HEMA 3染色;および定量化。各染色方法と定量化を使用した代表的な画像が含まれています。プロトコルは、細胞培養と各染色方法の重要なステップと考慮事項を特定し、Jenner-Giemsa染色のさらに簡単な代替品を提供します。©2019 by John Wiley＆Sons、Inc。Basic Protocol 1：Primary Myoblast Isolation Alternate Protocol 1：Plating Craing Cryopraste Myoblasts Basic Protocol 2：筋芽細胞の通過と拡張基本プロトコル3：筋芽細胞分化基本プロトコル4：HEMA 3染色代替プロトコル2：ゼナナー-GIEMSA染色基本プロトコル5：筋肉密度の定量化基本プロトコル6：融合指数基本プロトコル7：フィールドあたりの筋管の定量化。

Skeletal muscle tissue regeneration requires quiescent satellite cell activation, proliferation, and differentiation. Regenerative capacity of satellite cells can be studied in vitro by differentiating under low-serum conditions (2% to 5%) to form multinucleated myotubes. Myotubes are fixed and stained, and indices of differentiation are quantified. Jenner and Giemsa stains are typically used for myotube staining; however, this staining process can be variable depending on factors such as stain pH, staining time, and time since stain preparation. This article includes protocols for myoblast isolation, proliferation, and differentiation in vitro; Jenner-Giemsa staining; HEMA 3 staining; and quantification. Representative images using each staining method and quantification are included. The protocols identify critical steps and considerations for cell culture and each staining method and provide an even simpler alternative to Jenner-Giemsa staining. © 2019 by John Wiley & Sons, Inc. Basic Protocol 1: Primary myoblast isolation Alternate Protocol 1: Plating cryopreserved myoblasts Basic Protocol 2: Myoblast passage and expansion Basic Protocol 3: Myoblast differentiation Basic Protocol 4: HEMA 3 staining Alternate Protocol 2: Jenner-Giemsa staining Basic Protocol 5: Quantification of myotube density Basic Protocol 6: Quantification of fusion index Basic Protocol 7: Quantification of myotubes per field.