乾燥した血液斑点におけるレチノールの長期安定性の改善と、新規LC-MS/MSメソッドを介したレベルの定量化

ビタミンA欠乏症（VAD）は、小児の主要な微量栄養素欠乏です。血漿および血清レチノールレベルはVADの重要な指標として提案されていますが、野外研究では、血漿と血清の収集と輸送は困難で不便です。乾燥血液スポット（DBS）レチノールは、いくつかの疫学的および臨床研究における血漿レチノールの代替として使用されています。DBSレチノールを使用する方法の制限は、DBSSのレチノールの不安定性と明らかな損失です。したがって、DBSSのレチノールを安定化し、DBSレチノール濃度を同等の血漿レチノールレベルと定量化および比較するための正確で信頼できる方法が必要です。この研究では、真空処理と組み合わせた紙の抗酸化物質は、120分間の空気乾燥と30日間の室温貯蔵中のDBSレチノールの安定性を大幅に増加させることがわかった。PBSのヒト赤血球と2％BSAの混合物を使用して調製された全血の代理マトリックスは、レチノールが赤血球から除外されるという事実に基づいて、DBSレチノール測定で最初に使用されました。この方法は、0.04-300μg/mLの濃度範囲で線形でした。ラン間（n = 5）とラン内（n = 6）精度（相対標準偏差、RSD％）の両方が8.42％未満でした。3濃度でのスパイク回復は、86.48〜98.13％の範囲でした。内部標準（IS） - 正規化マトリックス因子（MF）は99.72％で、RSD％は10.50％（n = 3）でした。精度は、0.1962および0.3948 g/mlの濃度での2つの国立標準技術研究所（NIST）血清生成キャリブラントを使用して較正され、0.07％と4.95％の相対誤差（RE％値）がそれぞれ見つかりました。単純なキャリブレーションモデルは、DBSレチノール濃度を同等の血漿レチノール濃度に変換するために最初に開発され、臨床参照範囲との比較を可能にし、血清または血漿サンプルを使用した研究と比較しました。グラフィカルな抽象。

Vitamin A deficiency (VAD) is a major micronutrient deficiency in children. Although plasma and serum retinol levels are proposed as the key indicators of VAD, collecting and transporting plasma and serum are difficult and inconvenient in field studies. Dried blood spot (DBS) retinol has been used as an alternative to plasma retinol in several epidemiological and clinical studies. A limitation of methods that use DBS retinol is the instability and apparent loss of retinol in DBSs. Therefore, an accurate, reliable method for stabilizing retinol in DBSs and quantifying and comparing DBS retinol concentrations with equivalent plasma retinol levels is required. In this study, antioxidants on paper combined with vacuum treatment were found to greatly increase the stability of DBS retinol during 120 min of air drying and 30 days of room-temperature storage. A surrogate matrix of whole blood prepared using a mixture of human erythrocytes and 2% BSA in PBS was firstly used in DBS retinol determination based on the fact that retinol is excluded from erythrocytes. The method was linear in the concentration range of 0.04-300 μg/mL. Both the between-run (n = 5) and within-run (n = 6) precision (relative standard deviations, RSD%) were below 8.42%. The spiked recoveries at 3 concentrations ranged from 86.48 to 98.13%. The internal standard (IS)-normalized matrix factor (MF) was 99.72% with a RSD% of 10.50% (n = 3). The accuracy was calibrated using two National Institute of Standards and Technology (NIST) serum-generated calibrants at concentrations of 0.1962 and 0.3948 g/mL, and relative errors (RE% values) of 0.07% and 4.95% were found, respectively. A simple calibration model was first developed to convert DBS retinol concentration to the equivalent plasma retinol concentration, thereby enabling comparisons with clinical reference ranges and with studies using serum or plasma samples. Graphical abstract.