プライマリマウス骨髄由来マクロファージでのCRISPR/CAS9遺伝子ターゲティング

CRISPR-CAS9テクノロジーは、限られたオフターゲット効果を持つほぼすべての遺伝子座での迅速なターゲットゲノム編集を可能にします。ここでは、レトロウイルス形質導入を使用して、一次骨髄由来のマクロファージに単一ガイドRNAを送達する方法について説明します。このプロトコルは、一次免疫細胞におけるハイスループット逆逆遺伝学アッセイを可能にし、導入遺伝子発現のためのレトロウイルス系とも互換性があります。

CRISPR-Cas9 technology allows for rapid, targeted genome editing at nearly any loci with limited off-target effects. Here, we describe a method for using retroviral transduction to deliver single-guide RNA to primary bone marrow-derived macrophages. This protocol allows for high-throughput reverse genetics assays in primary immune cells and is also compatible with retroviral systems for transgene expression.