精子形成幹細胞移植における応用のためのさまざまな精子原性幹細胞精製方法の相対的な安全性

背景：男性の肥沃度保存の有望な選択肢としての精子糖質幹細胞（SSC）移植技術は、必要な技術サポートとして効率的なSSC精製技術とともに、注目を集めています。ただし、腫瘍の患者におけるそのような適用の安全性は議論の余地があります。 方法：この研究では、B細胞急性リンパ球性白血病の緑色蛍光タンパク質マウス異種移植モデルを使用しました。密度勾配遠心分離、免疫細胞磁気ビーズ分離、およびフローサイトメトリーを使用して、モデルマウスの精巣組織からSSCを分離および精製しました。精製されたSSCは、ヌードマウスの複雑なセミニン尿細管と、ブスルファンにさらされたC57BL/6個の雄マウスに移植されました。レシピエント精巣におけるSSCの発生と増殖は、SSC移植後にB細胞急性リンパ球性白血病が誘発されたかどうかとともに、定期的にテストされました。自然交配から得られた子孫の遺伝的特性も観察されました。 結果：精巣の白血病モデルマウスでは、精巣組織の精細尿細管、精子形成細胞、および精子細胞に浸透した多数のボール細胞が減少しました。精子細胞幹細胞移植の後、免疫磁気ビーズによって精製された移植されたSSCは、マウスの精油の地下に定着および広範囲に増殖したフローサイトメトリー法。12週間のSSC移植後、多数の精子形成細胞と精子がレシピエント精巣組織で発見されました。3つのSSC精製グループでの移植後のヌードマウスでの白血病検出では、密度勾配遠心分離群での移植後2〜3週間後にレシピエントマウスの血液で多数のボール細胞を検出できましたが、16週間の観察後のフローサイトメトリーソートグループと免疫磁気ビード基。 結論：この研究では、精巣白血病マウスモデルの精巣組織からSSCを精製する免疫磁性ビーズとフローサイトメトリー法が、腫瘍閉じ込めがない場合はSSC移植技術に安全に適用できることを確認しました。したがって、この結果は、腫瘍患者における出生率保存のための腫瘍SSC凍結保存の適用の理論的基礎を提供します。

BACKGROUND: Spermatogonial stem cell (SSC) transplantation technology as a promising option for male fertility preservation has received increasing attention, along with efficient SSC purification technology as a necessary technical support; however, the safety of such application in patients with tumors remains controversial. METHODS: In this study, we used a green fluorescent protein mouse xenograft model of B cell acute lymphocytic leukemia. We isolated and purified SSCs from the testicular tissue of model mice using density gradient centrifugation, immune cell magnetic bead separation, and flow cytometry. The purified SSCs were transplanted into convoluted seminiferous tubules of the nude mice and C57BL/6 male mice subjected to busulfan. The development and proliferation of SSCs in the recipient testis were periodically tested, along with whether B cell acute lymphocytic leukemia was induced following SSC implantation. The genetic characteristics of the offspring obtained from natural mating were also observed. RESULTS: In testicular leukemia model mice, a large number of BALL cells infiltrated into the seminiferous tubule, spermatogenic cells, and sperm cells in the testis tissue decreased. After spermatogonial stem cell transplantation, the transplanted SSCs purified by immunomagnetic beads and flow cytometry methods colonized and proliferated extensively in the basement of the seminiferous tubules of mice; a large number of spermatogenic cells and sperm were found in recipient testicular tissue after 12 weeks of SSC transplantation. In leukemia detection in nude mice after transplantation in the three SSC purification groups, a large number of BALL cells could be detected in the blood of recipient mice 2-3 weeks after transplantation in the density gradient centrifugation group, but not in the blood of the flow cytometry sorting group and the immunomagnetic bead group after 16 weeks of observation. CONCLUSIONS: In this study, we confirmed that immunomagnetic beads and flow cytometry methods of purifying SSCs from the testicular tissue of the testicular leukemia mouse model could be safely applied to the SSC transplantation technology without concomitant tumor implantation. The results thus provide a theoretical basis for the application of tumor SSC cryopreservation for fertility preservation in patients with tumors.