糖タンパク質分離の比較により、CE-SDSとSDS-PAGEの電気泳動移動度に対する炭水化物とジスルフィドの大きな影響が明らかになります

毛細血管電気泳動ドデシルスルフェート（CE-SDS）は、従来のドデシル硫酸塩 - ポリアクリルアミドゲル電気泳動（SDS-PAGE）に取って代わるバイオ医薬品分析において不可欠なツールとして浮上しています。2つのプラットフォーム上のネイティブタンパク質の同等の移動行動にもかかわらず、相関は、グリカンとジスルフィドの存在によってしばしば混乱する生物療法タンパク質について体系的に評価されていません。ここでは、還元条件と非還元条件の両方で2つの技術を使用して、さまざまな哺乳類の糖タンパク質を研究しました。結果は、毛細血管モードの下での電気泳動移動度の大幅な減少を明らかにしました。さらに、移行順序は、SDS-PAGEと比較して、減少した実行と非還元実行の間で逆転することがわかりました。このような効果は、シアリル化の含有量とは無関係であるように見えました。私たちの研究は、バイオ医薬品分析に重要なガイダンスを提供するゲルマトリックス、タンパク質、グリカン間の複雑な相互作用を発表しました。

Capillary electrophoresis sodium dodecyl sulfate (CE-SDS) has emerged as an indispensable tool in biopharmaceutical analysis to supersede the conventional sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). Despite the comparable migration behaviors of native proteins on the two platforms, the correlation has not been evaluated systematically for biotherapeutic proteins, which are often confounded by the presence of glycans and disulfides. Here we studied various mammalian glycoproteins using the two techniques under both reduced and non-reduced conditions. The results revealed substantial reduction in electrophoretic mobility under the capillary mode. Moreover, the migration order was found to be reversed between the reduced and nonreduced runs compared to SDS-PAGE. Such effects appeared to be independent of the content of sialylation. Our work unveiled complex interplays between the gel matrix, proteins and glycans which provide important guidance to biopharmaceutical analysis.