TIRF顕微鏡によりin vivoで膜関連の細菌細胞骨格タンパク質を研究する方法

MREBタンパク質は、非球体菌に存在するアクチンホモログです。それらは、細菌の側壁に沿って異なる動的な動作を示す膜関連の離散的な糸状構造に組み立てられます。総内部反射蛍光（TIRF）顕微鏡、細胞表面での分子イベントを高いコントラストと時間分解能で研究するための敏感な方法は、in vivoでの皮質MREBアセンブリの局在とダイナミクスを特徴付ける選択方法です。この章では、生きている亜種細胞における蛍光に触れたMREBタンパク質を視覚化する方法について説明します。（1）B。亜種の株を再現可能なTIRF観測のために栽培する方法を詳しく説明します。

MreB proteins are actin homologs present in nonspherical bacteria. They assemble into membrane-associated discrete filamentous structures that exhibit different dynamic behaviors along the bacterial sidewalls. Total internal reflection fluorescence (TIRF) microscopy, a sensitive method for studying molecular events at cell surfaces with high contrast and temporal resolution, is a method of choice to characterize the localization and dynamics of cortical MreB assemblies in vivo. This chapter describes the methods for visualizing fluorescently tagged MreB proteins in live Bacillus subtilis cells. We detail how to (1) grow B. subtilis strains for reproducible TIRF observations, (2) immobilize cells on agarose pads and (3) in CellASIC® microfluidic plates, and (4) acquire TIRF images and time lapses.