Triton X-100は、トルエン治療を受けた大腸菌におけるヌクレオシド三リン酸依存性のRecBC依存性DNA合成を活性化します

染色体複製がin vivoで終了した大腸菌細胞は、固定相への成長または制限条件下で温度感受性開始変異を運ぶ変異体のインキュベーションにより、トルエン治療細胞で測定されるin vitro DNA合成では不活性です。このような不活性システムに非イオン性洗剤Triton X-100を添加すると、ATP依存性のin vitro DNA合成が顕著に刺激されます。このトリトン刺激DNA合成は、ハイブリッド密度でのCSCL平衡遠心分離における前駆体バンドと標識された密度標識前駆体帯の存在下でin vitroで合成されたという点で、半保守的なメカニズムによって進行するようです。中性ショ糖勾配遠心分離は、このハイブリッド材料のほとんどが1 x 10を超える分子量を示すことを示しています（7）。トリトン刺激合成には、通常のin vivo複製と同様に、DNAポリメラーゼIIIの存在が必要です。ただし、トリトン/トルエン系のDNA合成のいくつかの異常な特性を示します。特に、in vivoでの組換えの修復合成に関与する酵素であるATP依存性エキソヌクレアーゼVを欠くRECB変異を抱える細胞には、トリトン刺激合成が存在しません。さらに、Triton刺激合成のATP要件は比較的非セプイフィクティックであり、さまざまなヌクレオシド三リン酸塩がATPに効果的に代用できます。最後に、中性ショ糖勾配遠心分離における高分子量にもかかわらず、トリトン刺激DNA合成は、アルカリスクロース勾配遠心分離によって決定されるように、低分子量（500 000未満）のDNA分子を生成します。対照的に、正常なトルエン処理細胞系のDNA合成はRecb活性に依存しておらず、他のヌクレオシド三リン酸に置き換えることができないATPのほぼ絶対要件を示し、アルカリ性ショ糖勾配で測定したようにはるかに大きな分子量の分子を生成します。。完全に採取されたデータは、Tritonが修復と複製の両方の側面を示すトルエン処理細胞の異常な形態のDNA合成を活性化することを強く示唆しています。これらの結果は、単純な複製DNA合成を研究するために、トリトン活性化トルエン治療細胞システムの使用に対する注意を払っています。

Escherichia coli cells whose chromosome replication has been terminated in vivo, either by growth into stationary phase or by incubation of a mutant carrying a temperature-sensitive initiation mutation under restrictive conditions, are inactive in in vitro DNA synthesis as measured in toluene-treated cells. Addition of the non-ionic detergent Triton X-100 to such inactive systems results in a marked stimulation of ATP-dependent in vitro DNA synthesis. This Triton-stimulated DNA synthesis appears to proceed by a semi-conservative mechanism, in that DNA synthesized in vitro in the presence of a density labeled precursor bands in CsCl equilibrium centrifugation at a hybrid density. Neutral sucrose gradient centrifugation demonstrates that most of this hybrid material exhibits a molecular weight in excess of 1 X 10(7). Triton-stimulated synthesis requires the presence of DNA polymerase III, as does normal in vivo replication. We show here, however, several anomalous properties of the DNA synthesis in the Triton/toluene system. In particular, Triton-stimulated synthesis is absent in cells harboring a recB mutation which lack the ATP-dependent exonuclease V, an enzyme implicated in recombinational repair synthesis in vivo. Furthermore, the ATP requirement for Triton-stimulated synthesis is relatively non-sepcific, and a variety of nucleoside triphosphates can effectively substitute for ATP. Finally, despite their high molecular weight in neutral sucrose gradient centrifugation, Triton-stimulated DNA synthesis generates DNA molecules of low molecular weight (less than 500 000) as determined by alkaline sucrose gradient centrifugation. In contrast, DNA synthesis in the normal toluene-treated cell system is not dependent on recB activity, shows a nearly absolute requirement for ATP which cannot be replaced by other nucleoside triphosphates, and produces molecules of far greater molecular weight as measured on alkaline sucrose gradients. Taken altogether the data strongly suggest that Triton activates an unusual form of DNA synthesis in toluene-treated cells which shows both repair and replicative aspects. These results caution against the use of Triton-activated toluene-treated cells system, for studying simple replicative DNA synthesis.