二価抗体断片化と再酸化時の製品純度の喪失に対する酵素減少の影響

製造プロセス中の抗体ジスルフィド結合（DSB）の減少は、収穫細胞培養液に存在する宿主細胞還元酵素に起因する広く観察された現象です。酵素誘発性抗体の還元は、精製プロセスの不純物の負担を増加させる産物の断片と凝集体につながります。診療所にますます入っている二価抗体（ビサブ）に対する減少の影響は、まだ調査されていません。私たちは、設計されたDSBを備えた追加のシングルチェーンFV（SCFV）フラグメントを持つ二価ビサブ形式の相同ライブラリの還元および再酸化特性に焦点を当てました。酵素の減少に対して同様の感受性を持っているすべてのビサブにもかかわらず、断片化経路はSCFV融合部位に依存していました。低いpHウイルスの不活性化治療の有無にかかわらず、減少分子は再酸化を許可しました。両方の再酸化研究により、DSBの誤った誤りの結果として形成された複数の複雑なビサブ種が実証されました。さらに、低pH処理が適用されなかった場合、すべての分子の凝集レベルが増加しました。合わせて、我々の結果は、複雑なDSBの誤解が下流のプロセス中に発生し、凝集形成がサンプル治療に依存していることを示しています。これらの結果は、工学的DSBを含む他の新規モノクローナル抗体様形式に適用できます。したがって、製造中の製品品質の低下を避けるために、新規タンパク質治療薬の減少を防ぐ必要性を強調しています。

Antibody disulfide bond (DSB) reduction during manufacturing processes is a widely observed phenomenon attributed to host cell reductases present in harvest cell culture fluid. Enzyme-induced antibody reduction leads to product fragments and aggregates that increase the impurity burden on the purification process. The impact of reduction on bivalent bispecific antibodies (BisAbs), which are increasingly entering the clinic, has yet to be investigated. We focused on the reduction and reoxidation properties of a homologous library of bivalent BisAb formats that possess additional single-chain Fv (scFv) fragments with engineered DSBs. Despite all BisAbs having similar susceptibilities to enzymatic reduction, fragmentation pathways were dependent on the scFv-fusion site. Reduced molecules were allowed to reoxidize with and without low pH viral inactivation treatment. Both reoxidation studies demonstrated that multiple, complex BisAb species formed as a result of DSB mispairing. Furthermore, aggregate levels increased for all molecules when no low pH treatment was applied. Combined, our results show that complex DSB mispairing occurs during downstream processes while aggregate formation is dependent on sample treatment. These results are applicable to other novel monoclonal antibody-like formats containing engineered DSBs, thus highlighting the need to prevent reduction of novel protein therapeutics to avoid diminished product quality during manufacturing.