Roscovitineは、全トランスレチノイン酸（ATRA）誘発性白血病細胞分化を促進します：推定CDK2阻害剤のシグナル伝達分子に対する新規効果

全トランスレチノイン酸（ATRA）ベースの分化療法は、T（15; 17）陰性骨髄性白血病（AML）患者の治療に失敗し、ATRAと他の薬剤を使用した併用療法への関心を動機づけています。T（15、17）陰性HL-60ヒト骨髄芽球性白血病モデルを使用して、サイクリン依存性キナーゼ（CDK）阻害剤であるRoscovitineが、分化を推進し、アトラ誘発性分化を促進するATRA誘発性高分子シグナルソームによるシグナル伝達を増強することがわかります。。Roscovitine Co-treatmentは、PS259-PS289/296/301- PS621-C-RAF、PS217/221-MEK、SRCファミリーキナーゼ（SFK）LynおよびFGRおよびSFK Y416リン酸化、アダプタープロテインC-CCBLおよびSFK Y416のATRA誘導発現を強化しました。信号でSLP-76、VAV、およびアセチル化14-3-3。Roscovitineは、Lyn、Vav、およびC-CblとのATRA誘発C-RAF相互作用を強化しました。シグナルの過活性化と一致して、Roscovitine Co-treatmentはATRA誘発G1/0の停止と分化マーカーの発現、CD11B、ROSおよびP47 Phoxの発現を強化しました。RoscovitineはLynの発現、活性化、およびパートナーシングを調節したため、安定してトランスフェクトされたLynノックダウンがWT-Parental細胞から生成され、ATRA誘導の分化におけるその機能を調査しました。Lyn-Knockdownは、主要なシグナル分子、C-RAF、PS259-C-RAF、PS289/296/301-C-RAF、VAV1、SLP-76、およびFGRのATRA誘発性アップレギュレーションを強化しましたが、本質的に総損失があります。PY416-SFK。ATRA処理WT-Parental細胞と比較して、分化マーカーP47 PHOX、CD11B、G1/G0停止、およびROS産生がATRA処理されたLyn-Knockdown安定トランスファー剤で強化され、Roscovitineの添加により、これらのATRAに依存しないマーカーがさらに強化されました。Lyn-Knockdownセルは、WT-Parental細胞よりもわずかに高いC-RAF、PS259-C-RAF、PS289/296/301-C-RAF、およびSLP-76を発現しました。また、細胞分化は、高度化されたシグナル伝達と一致しており、FGRの強化がLynの喪失を補償してLyn-Knockdownセルの分化を促進した可能性があることを示唆しています。

All-trans retinoic acid (ATRA)-based differentiation therapy has been unsuccessful in treating t(15;17) negative acute myeloid leukemia (AML) patients, motivating interest in combination therapies using ATRA plus other agents. Using the t (15, 17) negative HL-60 human myeloblastic leukemia model, we find that the cyclin-dependent kinase (CDK) inhibitor, roscovitine, augments signaling by an ATRA-induced macromolecular signalsome that propels differentiation and enhances ATRA-induced differentiation. Roscovitine co-treatment enhanced ATRA-induced expression of pS259- pS289/296/301- pS621-c-Raf, pS217/221-Mek, Src Family Kinases (SFKs) Lyn and Fgr and SFK Y416 phosphorylation, adaptor proteins c-Cbl and SLP-76, Vav, and acetylated 14-3-3 in the signalsome. Roscovitine enhanced ATRA-induced c-Raf interaction with Lyn, Vav, and c-Cbl. Consistent with signalsome hyper-activation, roscovitine co-treatment enhanced ATRA-induced G1/0 arrest and expression of differentiation markers, CD11b, ROS and p47 Phox. Because roscovitine regulated Lyn expression, activation and partnering, a stably transfected Lyn knockdown was generated from wt-parental cells to investigate its function in ATRA-induced differentiation. Lyn-knockdown enhanced ATRA-induced up-regulation of key signalsome molecules, c-Raf, pS259-c-Raf, pS289/296/301-c-Raf, Vav1, SLP-76, and Fgr, but with essentially total loss of pY416-SFK. Compared to ATRA-treated wt-parental cells, differentiation markers p47 phox, CD11b, G1/G0 arrest and ROS production were enhanced in ATRA-treated Lyn-knockdown stable transfectants, and addition of roscovitine further enhanced these ATRA-inducible markers. The Lyn-knockdown cells expressed slightly higher c-Raf, pS259-c-Raf, pS289/296/301-c-Raf, and SLP-76 than wt-parental cells, and this was associated with enhanced ATRA-induced upregulation of Fgr and cell differentiation, consistent with heightened signaling, suggesting that enhanced Fgr may have compensated for loss of Lyn to enhance differentiation in the Lyn-knockdown cells.