ニューロステロイドアロプレグナノロンは、ラット緑内障モデルのオートファジーおよびGABRS/GABAA受容体への影響により網膜ニューロンを保護します

解剖された網膜を使用したex vivoラット緑内障モデルでは、ニューロステロイドアロプレグナノロン（Allop）は、GABR/GABAA受容体を介して網膜神経節細胞（RGC）を保護します。アロップによる神経保護におけるマクロオートファジー/オートファジーの関与を決定するために、オートファジー活性化因子、ラパマイシンおよびトリン2、およびオートファジー阻害剤、バフィロマイシンA1およびSAR405の効果を調べました。タンパク質1ライトチェーン3ベータ）およびSQSTM1（Semecestosome 1）。ラパマイシンまたはトリン2の投与は部分的な組織学的神経保護を発揮し、一方、バフィロマイシンA1またはSAR405とのアロップの組み合わせを組み合わせて、高圧状態で重度の変性を誘発しました。電子顕微鏡分析により、アロップの添加により、網膜神経線維層におけるオートファゴソームと変性オートファジー液胞が大幅に増加することが示されました。免疫ブロットティングは、アロップまたはオートファジーアクティベーターの添加がLC3B（LC3B-II）の脂質化型を増加させ、SQSTM1を抑制することを示しました。さらに、Bafilomycin A1は、高圧条件でのAllop処理網膜と比較して、対応するmRNAの変化なしにAllopの存在下でLC3B-IIおよびSQSTM1タンパク質レベルを増加させました。これらのデータは、アロップがこのモデルでオートファジーの保護形態を誘導する可能性が高いことを示しています。緑内障のin vivoラットモデルでは、アロップの神経保護効果も観察されました。前房へのポリスチレンマイクロビーズの注射は、約3倍に眼圧を増加させ、RGCアポトーシスを誘導しました。アロップまたはオートファジー活性化因子の単一の硝子体内注射により、アポトーシスが防止され、オートファジーの活性化によるRGCが保護されました。アロップは、多様なメカニズムを介して緑内障の治療の潜在的な治療薬として機能する可能性があると結論付けています。3-MA：3-メチルアデニン;allop：allopregnanolone;AP：オートファゴソーム;AVD：分解性オートファジー液胞;GCL：神経節細胞層;INL：内部核層;IOP：眼圧;IPL：内側の頸部層;LC3B-I：LC3Bのサイトゾル型;LCB-II：LC3Bの脂質化型;MAP1LC3B/LC3B：微小管関連タンパク質1軽鎖3ベータ。MPTP：ミトコンドリア透過性遷移孔;NDS：ニューロン損傷スコア。NFL：神経線維層;OH：眼の高血圧。オン：視神経;ONL：外側の核層;OPL：外側の脳皮層;P-STR：スコトピックしきい値応答。RGC：網膜神経節細胞。RT-PCR：リアルタイム逆転写ポリメラーゼ連鎖反応。SQSTM1：SemeStosome 1;Tunel：TDTを介したDutpニックエンドラベル。

In an ex vivo rat glaucoma model using dissected retinas, the neurosteroid allopregnanolone (AlloP) protects retinal ganglion cells (RGCs) via GABR/GABAA receptors. To determine the involvement of macroautophagy/autophagy in neuroprotection by AlloP, we examined the effects of autophagy activators, rapamycin and torin 2, and autophagy inhibitors, bafilomycin A1 and SAR405, on retinal retinal morphology and expression of MAP1 LC3B/LC3B (microtubule-associated protein 1 light chain 3 beta) and SQSTM1 (sequestosome 1). Administration of rapamycin or torin 2 exerted partial histological neuroprotection, while combined administration of AlloP with bafilomycin A1 or SAR405 induced severe degeneration in a hyperbaric condition. Electron microscopic analyses showed that the addition of AlloP significantly increased autophagosomes and degenerative autophagic vacuoles in the retinal nerve fiber layer. Immunoblotting showed that the addition of AlloP or autophagic activators increased the lipidated form of LC3B (LC3B-II) and suppressed SQSTM1. Moreover, bafilomycin A1 increased LC3B-II and SQSTM1 protein levels in the presence of AlloP without changes in corresponding mRNAs compared to AlloP-treated retinas in a hyperbaric condition. These data indicate that AlloP likely induces a protective form of autophagy in this model. In an in vivo rat model of glaucoma, we also observed neuroprotective effects of AlloP. Injection of polystyrene microbeads into the anterior chamber increased intraocular pressure about 3-fold and induced RGC apoptosis. A single intravitreal injection of AlloP or autophagy activators prevented apoptosis and protected RGCs with autophagy activation. We conclude that AlloP may serve as a potential therapeutic agent for the treatment of glaucoma via diverse mechanisms.Abbreviations: 2HBCD: 2-Hydroxypropyl)-β-cyclodextrin; 3-MA: 3-methyladenine; AlloP: allopregnanolone; AP: autophagosome; AVd: degradative autophagic vacuoles; GCL: ganglion cell layer; INL: inner nuclear layer; IOP: intraocular pressure; IPL: inner plexiform layer; LC3B-I: cytosolic form of LC3B; LCB-II: lipidated form of LC3B; MAP1LC3B/LC3B: microtubule-associated protein 1 light chain 3 beta; mPTP: mitochondrial permeability transition pore; NDS: neuronal damage score; NFL: nerve fiber layer; OH: ocular hypertension; ON: optic nerve; ONL: outer nuclear layer; OPL: outer plexiform layer; p-STR: scotopic threshold response; RGC: retinal ganglion cells; RT-PCR: real-time reverse transcription polymerase chain reaction; SQSTM1: sequestosome 1; TUNEL: TdT-mediated dUTP Nick End Labeling.