ポンコーsを使用して、総タンパク質の塊を染色します

抗原の存在のためにブロットを調査する前に、移動したタンパク質の総組成は、ニトロセルロースまたはフッ化ビニリデン（PVDF）膜を染色することにより決定できます。タンパク質の染色は、ゲル上の非予測分子量マーカーまたは個々のレーンの位置を決定し、効率的な伝達が発生したことを確認するのに役立ちます。また、異なるサンプル間の目的のタンパク質の比較が重要である場合、ゲル内のサンプルの等しい負荷を検証するためにも使用できます。ポリアクリルアミドゲルの染色に使用されるクーマシーブルーや銀染色方法などの従来の手順は、免疫ブロットと互換性がありません。ポンコーSは、抗体抗原結合と互換性があり、コスト効率が高く、染色されたバンドと背景の間で良好なコントラストを提供するため、免疫ブロットプロトコルのより一般的な染色方法です。このプロトコルでは、ニトロセルロースまたはPVDF膜は、タンパク質の移動後にウルトラピアH2Oで洗浄されます。ポンコーS色素は酸性水溶液として適用され、膜上のタンパク質は赤色で染色されています。膜は水で一時的に命じられており、総タンパク質染色の画像を得るために写真を撮ったりスキャンしたりすることができます。必要に応じて、個々の車線の位置または分子量の標準は鉛筆でマークできます。

Before probing blots for the presence of an antigen, the total composition of the transferred proteins can be determined by staining the nitrocellulose or polyvinylidene fluoride (PVDF) membrane. Staining for proteins is useful to determine the position of the non-prestained molecular weight markers or individual lanes on the gel and to ensure that efficient transfer has occurred. It can be also used to verify equal loading of the samples in the gel when a comparison of the protein of interest between the different samples is important. The conventional procedures such as Coomassie Blue and silver staining methods used for staining polyacrylamide gels are incompatible with immunoblotting. Ponceau S is the more common staining method in immunoblotting protocols because it is compatible with antibody-antigen binding, is cost efficient, and provides a good contrast between the stained bands and background. In this protocol, nitrocellulose or PVDF membrane is rinsed with ultrapure H2O after the transfer of proteins. Ponceau S dye is applied as an acidic aqueous solution, and the proteins on the membrane are stained with red color. The membrane is briefly destained with water and can be photographed or scanned to obtain the image of the total protein staining. Individual lane positions or the molecular weight standards can be marked with a pencil, if required.