ヒトリンパ球活性化アッセイの企業間評価

非臨床免疫毒性評価は、医薬品の安全性評価の重要な要素です。証拠評価の重みで適用できるin vitroアッセイの1つは、抗原リコールアッセイであるヒトリンパ球活性化（HULA）アッセイです。応答を生成するには、複数の免疫細胞タイプが必要です。このアッセイはヒト細胞を使用し、TDARから複合ランキングおよび機構研究よりも適切です。Hulaアッセイは、TDARアッセイよりも少ない時間と薬物を必要とし、関連する抗原（インフルエンザ）を使用し、ヒト免疫応答を反映し、3RSの原則を非臨床安全評価に適用します。インフルエンザ免疫ドナーからの末梢血単核細胞（PBMC）は、試験物の存在下でインフルエンザワクチンで再刺激され、増殖が測定されます。公開されたデータは、Hulaアッセイの適用性を示していますが、テストサイト全体で再現性について評価されていません。アッセイの再現性を評価するために、機関のコンソーシアムの科学者は、ドナーPBMC、インフルエンザワクチン、および既知の免疫抑制化合物（シクロスポリンAおよびマイコフィノール酸）の一般的なプールを使用して、アッセイを並行して実施しました。Hulaアッセイは、抗原特異的応答の阻害の同定において非常に再現性が高く、半分の最大阻害濃度（IC50）値の試験部位全体で有意な一致がありました。サイト内変動は、アッセイ内で観察される変動性の最大の貢献者でした。Hulaアッセイは、同じアッセイ内の複数の化合物（つまり、化合物ランキングまたはベンチマーク）を比較するのに理想的に適していることが実証されました。全体として、ここで報告されているデータは、抗原特異的免疫応答の機械的評価における有用なツールとしてHulaアッセイをサポートしています。

Nonclinical immunotoxicity evaluation is an important component of safety assessment for pharmaceuticals. One in vitro assay that can be applied in a weight of evidence assessment is the human lymphocyte activation (HuLA) assay, an antigen recall assay, similar in many respects to the in vivo T-cell-dependent antibody response (TDAR) in that cooperation of multiple immune cell types are needed to produce responses. This assay uses human cells and is more amenable than the TDAR to compound ranking and mechanistic studies. The HuLA assay requires less time and drug than TDAR assays, uses a relevant antigen (influenza), reflects a human immune response, and applies principles of the 3Rs to non-clinical safety assessment. Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from flu-immunized donors are re-stimulated with flu-vaccine in the presence of test articles, and proliferation is measured. Published data demonstrate the applicability of the HuLA assay, but it has not been evaluated for reproducibility across testing sites. To evaluate assay reproducibility, scientists from a consortium of institutions conducted the assay in parallel, using a common pool of donor PBMC, influenza vaccine, and known immunosuppressant compounds (cyclosporine A and mycophenolic acid). The HuLA assay was highly reproducible in identification of inhibition of antigen-specific responses, and there was significant agreement across testing sites in the half maximal inhibitory concentration (IC50) values. Intra-site variability was the largest contributor to the variability observed within the assay. The HuLA assay was demonstrated to be ideally suited to comparing multiple compounds (i.e. compound ranking or benchmarking) within the same assay. Overall, the data reported herein support the HuLA assay as a useful tool in mechanistic evaluations of antigen-specific immune responses.