ピラゾールは、マウスのポリブストレートモノオキシゲナーゼ系の誘導剤としてのアセトンやエタノールとは異なります。ピラゾール誘導性P450COHがアセトン誘導性P450ACとは異なるという証拠

ピラゾール、エタノール、およびアセトンによって誘発される肝臓ミクロソームモノオキシゲナーゼ活性の誘導はすべて、ラットP450Jおよびウサギp450LM3Aの誘導者であることが示されており、DBA/2N、AKR/J、およびBALB/Cマウスの近交系株で比較されています。ピラゾールは、DBA/2Nでクマリン7-ヒドロキシラーゼ（COH）活性を強く増加させますが、他の株でははるかに少なくなります。アニリンP-ヒドロキシラーゼおよびエタノールオキシダーゼ活性に対するピラゾールの効果も株に依存します。DBA/2N株でのみ増加が見られました。エタノールとアセトンはCOHを誘導することができませんでしたが、アニリンP-ヒドロキシラーゼとエタノールオキシダーゼは、すべての株で約1.4〜3.3倍上昇しました。アニリンP-ヒドロキシラーゼまたはエタノールオキシダーゼ誘導性でひずみの違いは検出できませんでした。すべての株でアニリンp-ヒドロキシラーゼとエタノールオキシダーゼ活性の間には強い相関がありましたが、COHとアニリンP-ヒドロキシラーゼ活性の間には正の相関は見られませんでした。免疫阻害実験により、精製ピラゾール誘導性COH（P450COH）に対するポリクローナル抗体がCOH活性の約90％をブロックすることが示されましたが、アニリンP-ヒドロキシラーゼまたはエタノールオキシダーゼのマウス肝臓ミクロソームのエタノールオキシダーゼの約10％のみがブロックしました。モノクローナル抗体1-91-3（ラットアセトン誘導性P450ACに対して隆起した）はCOHを阻害しませんでしたが、アニリンP-ヒドロキシラーゼはマイクロソームの供給源に応じて46-76％およびエタノールオキシダーゼ25-70％をブロックしました。免疫ブロットでは、抗P450COHはP450ACではなく独自の抗原のみを認識しましたが、P450ACに対するモノクローナル抗体1-98-1は、P450ACとD2マウス肝臓で対応する型を検出しましたが、P450COHではありませんでした。精製されたP450ACおよびP450COHは、それぞれ52および50 kDaの分子量を、それぞれドデシル硫酸ポリアクリルアミドゲル電気泳動で52 kDaでした。これらの抗原は、ピラゾール、エタノール、およびアセトンに応答して差次的に発現しました。P450CoHはピラゾール処理後にのみ増加しましたが、1-98-1検出可能なタンパク質は、エタノールとアセトンによってD2マウス肝臓ミクロソームではなく、ピラゾールではなく上昇しました。マウスP450COHおよびラットP450ACは、同じアイソザイムの対応する形態ではなく、アニリンP-ヒドロキシル化とエタノール酸化のほとんどを担当するP450AC様タンパク質がD2マウス肝臓に存在すると結論付けています。これら2つのP450アイソザイムは、誘導投与に応じてマウス肝臓でも類似して発現しています。

The induction of liver microsomal monooxygenase activities elicited by pyrazole, ethanol, and acetone, all shown to be inducers of rat P450j and rabbit P450LM3a, has been compared in inbred strains of DBA/2N, AKR/J, and Balb/c mouse. Pyrazole strongly increases coumarin 7-hydroxylase (COH) activity in DBA/2N but much less in other strains. The effect of pyrazole on aniline p-hydroxylase and ethanol oxidase activities is also strain dependent: an increase was seen only in the DBA/2N strain. Ethanol and acetone were unable to induce COH, whereas aniline p-hydroxylase and ethanol oxidase were elevated about 1.4- to 3.3-fold in all strains. No strain difference could be detected in aniline p-hydroxylase or ethanol oxidase inducibility. There was a strong correlation between aniline p-hydroxylase and ethanol oxidase activities in every strain, whereas no positive correlation could be found between COH and aniline p-hydroxylase activities. Immunoinhibition experiments showed that a polyclonal antibody against purified pyrazole-inducible COH (P450Coh) blocked about 90% of COH activity, but only about 10% of aniline p-hydroxylase or ethanol oxidase in mouse liver microsomes. Monoclonal antibody 1-91-3 (raised against rat acetone-inducible P450ac) did not inhibit COH, whereas aniline p-hydroxylase was blocked 46-76% and ethanol oxidase 25-70%, depending on the source of microsomes. In immunoblots, anti-P450Coh recognized only its own antigen but not the P450ac, whereas monoclonal antibody 1-98-1 against P450ac detected P450ac and a corresponding form in the D2 mouse liver, but not the P450Coh. The purified P450ac and P450Coh had molecular masses of 52 and 50 kDa, respectively, on sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis. These antigens were expressed differentially in response to pyrazole, ethanol, and acetone: P450Coh was increased only after pyrazole treatment, but 1-98-1-detectable protein was elevated in D2 mouse liver microsomes by ethanol and acetone, but not by pyrazole. We conclude that mouse P450Coh and rat P450ac are not corresponding forms of the same isozyme, and that a P450ac-like protein, responsible for most of aniline p-hydroxylation and ethanol oxidation, is present in the D2 mouse liver. These two P450 isozymes are also dissimilarly expressed in the mouse liver in response to inducer administration.