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Voprosy virusologii20190101Vol.64issue(6)

[オルソポキシウイルス(オルソポクスビロス、コルドポックスヴィリナエ、poxviridae)の検出のための迅速な免疫化学的方法]]

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文献タイプ:
  • Journal Article
  • Research Support, Non-U.S. Gov't
概要
Abstract

はじめに:天然poワクチン接種の廃止により、Poxウイルスに対する人口の免疫が消失しました。しかし、病原性のオルソポキシウイルスによる感染の脅威は持続し、病原体を示すための敏感で運用上の方法を開発する必要性を決定します。 目的:«Point of Care»形式でのオルソポックスウイルスの検出のための敏感で高速で使いやすい免疫化学試験の開発。 材料と方法:さまざまな程度の精製、高免疫性ウサギ血清からのポリクローナル抗体、およびフラットタンパク質アレイ上のドット免疫アッセイ用の自律キットからの機器を備えた文化的ワクチニアウイルス(VV)の準備を使用しました。 結果と議論:ウサギポリクローナル抗体は、基板上に固定された捕獲剤として、またコロイドの金粒子に結合した検出試薬として、単一段階の密度分析で使用できることが確立されています。VVの検出の有効性は、ウイルス以下からの精製の程度に反比例することが示されています。粗調和におけるウイルスの迅速な検出の感度は、純粋なウイルス材料の約30倍でした。おそらく、感度の増加は、感作された金粒子の大きな凝集体を形成するサブウイルス構造の捕捉抗体への結合のために発生します。このテストでは、外来疾患を引き起こす不均一なウイルス(麻疹、風疹、鶏po)による交差反応は検出されません。 結論:ドット免疫測定法の1段階のバリアントは、分析時間を40分に短縮し、105-104 PFU / mLの範囲に対する粗ウイルス製剤におけるオルソポックスウイルスの検出感度を改善します。完全なメイク、分析の容易さ、および結果を視覚的に会計処理する能力により、テストを実験室の外で使用することができます。

はじめに:天然poワクチン接種の廃止により、Poxウイルスに対する人口の免疫が消失しました。しかし、病原性のオルソポキシウイルスによる感染の脅威は持続し、病原体を示すための敏感で運用上の方法を開発する必要性を決定します。 目的:«Point of Care»形式でのオルソポックスウイルスの検出のための敏感で高速で使いやすい免疫化学試験の開発。 材料と方法:さまざまな程度の精製、高免疫性ウサギ血清からのポリクローナル抗体、およびフラットタンパク質アレイ上のドット免疫アッセイ用の自律キットからの機器を備えた文化的ワクチニアウイルス(VV)の準備を使用しました。 結果と議論:ウサギポリクローナル抗体は、基板上に固定された捕獲剤として、またコロイドの金粒子に結合した検出試薬として、単一段階の密度分析で使用できることが確立されています。VVの検出の有効性は、ウイルス以下からの精製の程度に反比例することが示されています。粗調和におけるウイルスの迅速な検出の感度は、純粋なウイルス材料の約30倍でした。おそらく、感度の増加は、感作された金粒子の大きな凝集体を形成するサブウイルス構造の捕捉抗体への結合のために発生します。このテストでは、外来疾患を引き起こす不均一なウイルス(麻疹、風疹、鶏po)による交差反応は検出されません。 結論:ドット免疫測定法の1段階のバリアントは、分析時間を40分に短縮し、105-104 PFU / mLの範囲に対する粗ウイルス製剤におけるオルソポックスウイルスの検出感度を改善します。完全なメイク、分析の容易さ、および結果を視覚的に会計処理する能力により、テストを実験室の外で使用することができます。

INTRODUCTION: The abolition of smallpox vaccination has led to the disappearance of population immunity to pox viruses. However, the threat of infection by pathogenic orthopoxviruses persists and determines the need to develop sensitive and operational methods for indicating pathogens. OBJECTIVES: Development of a sensitive, fast and easy-to-use immunochemical test for the detection of orthopoxviruses in the «point of care» format. MATERIAL AND METHODS: We used preparations of cultural vaccinia virus (VV) with varying degrees of purification, polyclonal antibodies from hyperimmune rabbit serum, and equipment from a previously developed autonomous kit for dot-immunoassay on flat protein arrays. RESULTS AND DISCUSSION: It has been established that rabbit polyclonal antibodies can be used in a single-stage dotanalysis, both as a capture agent immobilized on a substrate and as a detection reagent bound with colloidal gold particles. It is shown that the effectiveness of the detection of VV is inversely related to the degree of purification of viruses from sub-viral structures. The sensitivity of the rapid detection of viruses in a crude preparation was about 30 times higher than in pure viral material. The increase in sensitivity, presumably, occurs due to binding to the capture antibodies of subviral structures, which form large aggregates of sensitized gold particles. The test does not detect cross-reactions with heterogeneous viruses (measles, rubella and chickenpox) that cause exantematous diseases. CONCLUSION: The one-stage variant of the dot-immunoassay reduces the analysis time to 40 minutes and improves the detection sensitivity of orthopoxviruses in crude viral preparations to the range of 105-104 PFU / ml. Full makeup, ease of analysis and the ability to visually accounting for results allow the test to be used outside of laboratories.

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