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シュードウイルスは、特にウイルスの出現と再登場のために、安全性と汎用性のために有用なウイルス学的ツールです。その高病原性と感染性、および効果的なワクチンと治療薬の欠如により、ライブSARS-COV-2は、ワクチンと治療薬の開発を妨げているバイオセーフティレベル3条件下で処理する必要があります。VSVシュードウイルス生産システムに基づいて、バイオセーフティレベル2施設のSARS-COV-2に対する中和抗体を評価するために、シュードウイルスベースの中和アッセイが開発されました。このアッセイの重要なパラメーターは、細胞型、細胞数、ウイルス接種を含む最適化されました。SARS-COV-2シュードウイルスに対してテストされたとき、SARS-COV-2回復期の患者血清は、治療薬としての可能性を強調する高中和効力を示しました。このアッセイの検出限界は、120個の負のサンプルのパネルを使用して、それぞれヒトおよびマウスの血清サンプルで22.1および43.2として決定されました。カットオフ値は、それぞれヒトおよびマウスの血清サンプルで30および50として設定されました。このアッセイでは、それぞれアッセイ内分析とアッセイ間分析でそれぞれ15.9％と16.2％で、変動係数が比較的低いことが示されました。まとめると、SARS-COV-2の堅牢なシュードウイルスベースの中和アッセイを確立し、この致命的なウイルスと戦うためにワクチンまたは治療薬の開発者と偽ウイルスと関連プロトコルを共有できることを喜んでいます。
シュードウイルスは、特にウイルスの出現と再登場のために、安全性と汎用性のために有用なウイルス学的ツールです。その高病原性と感染性、および効果的なワクチンと治療薬の欠如により、ライブSARS-COV-2は、ワクチンと治療薬の開発を妨げているバイオセーフティレベル3条件下で処理する必要があります。VSVシュードウイルス生産システムに基づいて、バイオセーフティレベル2施設のSARS-COV-2に対する中和抗体を評価するために、シュードウイルスベースの中和アッセイが開発されました。このアッセイの重要なパラメーターは、細胞型、細胞数、ウイルス接種を含む最適化されました。SARS-COV-2シュードウイルスに対してテストされたとき、SARS-COV-2回復期の患者血清は、治療薬としての可能性を強調する高中和効力を示しました。このアッセイの検出限界は、120個の負のサンプルのパネルを使用して、それぞれヒトおよびマウスの血清サンプルで22.1および43.2として決定されました。カットオフ値は、それぞれヒトおよびマウスの血清サンプルで30および50として設定されました。このアッセイでは、それぞれアッセイ内分析とアッセイ間分析でそれぞれ15.9％と16.2％で、変動係数が比較的低いことが示されました。まとめると、SARS-COV-2の堅牢なシュードウイルスベースの中和アッセイを確立し、この致命的なウイルスと戦うためにワクチンまたは治療薬の開発者と偽ウイルスと関連プロトコルを共有できることを喜んでいます。
Pseudoviruses are useful virological tools because of their safety and versatility, especially for emerging and re-emerging viruses. Due to its high pathogenicity and infectivity and the lack of effective vaccines and therapeutics, live SARS-CoV-2 has to be handled under biosafety level 3 conditions, which has hindered the development of vaccines and therapeutics. Based on a VSV pseudovirus production system, a pseudovirus-based neutralization assay has been developed for evaluating neutralizing antibodies against SARS-CoV-2 in biosafety level 2 facilities. The key parameters for this assay were optimized, including cell types, cell numbers, virus inoculum. When tested against the SARS-CoV-2 pseudovirus, SARS-CoV-2 convalescent patient sera showed high neutralizing potency, which underscore its potential as therapeutics. The limit of detection for this assay was determined as 22.1 and 43.2 for human and mouse serum samples respectively using a panel of 120 negative samples. The cutoff values were set as 30 and 50 for human and mouse serum samples, respectively. This assay showed relatively low coefficient of variations with 15.9% and 16.2% for the intra- and inter-assay analyses respectively. Taken together, we established a robust pseudovirus-based neutralization assay for SARS-CoV-2 and are glad to share pseudoviruses and related protocols with the developers of vaccines or therapeutics to fight against this lethal virus.
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