BMI1をトランスフェクトした不死化喉頭上皮細胞の確立

原発性喉頭上皮細胞は、喉頭障害と声障害のメカニズムを探るために不可欠です。ただし、寿命が限られているため、勉強して適用することは困難です。この研究の目的は、喉頭疾患と音声疾患の病因に関する包括的な研究のために、安定した信頼できるin vitroモデルを開発することでした。PLVTHM-BMI1プラスミドを構築し、レンチウイルス感染により原発性喉頭上皮細胞を不死化するために使用されました。BMI1、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（HTERT）、p53、およびPRB経路タンパク質の発現は、ウエスタンブロッティングによって検出されました。不死化細胞株の機能特性は、細胞老化β-ガラクトシダーゼ染色、5-エチニル-2'-デオキシウリジン細胞増殖テスト、およびフローサイトメトリーによって検証されました。BMIをヒト下栄養（HSG）細胞とヒト心室（HV）細胞に導入しました。ヒトの不死化亜栄養水準地下BMI1（HSG-BMI1）細胞株とヒト不死化心室BMI1（HV-BMI1）細胞株の両方が正常な上皮形態を維持し、20を超える培養継代後にうまく分割されました。これらの細胞でBMI1が過剰発現すると、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（HTERT）の発現が増加し、P16およびP21は減少しました。BMI1を介した不死化に続いて、細胞の老化は大幅に減少し、細胞増殖が加速しました。ヌードマウスのHSG、HV、またはHSG-BMI1、およびHV-BMI1細胞については、腫瘍形成は観察されませんでした。層状扁平上皮と柱状細胞が支配するHV-BMI1細胞が支配するHSG-BMI1細胞が確立されました。新しい細胞株は、喉頭疾患と声の病気の病原性メカニズムの研究の基礎を築きます。

Primary laryngeal epithelial cells are essential to exploring the mechanisms of laryngeal and voice disorders; however, they are difficult to study and apply because of their limited life span. The purpose of this study was to develop a stable and reliable in vitro model for the comprehensive study of the pathogenesis of laryngeal and voice diseases. The pLVTHM-Bmi1 plasmid was constructed and used to immortalize primary laryngeal epithelial cells by lentiviral infection. The expressions of Bmi1, human telomerase reverse transcriptase (hTERT), p53, and pRB pathway proteins were detected by western blotting. Functional characteristics of the immortalized cell lines were verified by cell senescence β-galactosidase staining, 5-ethynyl-2'-deoxyuridine cell proliferation test, and flow cytometry. We successfully introduced Bmi into human subglottic (hSG) cells and human ventricle (hV) cells. Both the human immortalized subglottic Bmi1 (hSG-Bmi1) cell line and the human immortalized ventricle Bmi1 (hV-Bmi1) cell line maintained normal epithelial morphology and divided successfully after more than 20 culture passages. As Bmi1 was overexpressed in these cells, the expression of human telomerase reverse transcriptase (hTERT) and phosphorylated Rb increased while p16 and p21 decreased. Following Bmi1-mediated immortalization, cell senescence decreased significantly, and cell proliferation was accelerated. Tumor formation was not observed for hSG, hV, or hSG-Bmi1, and hV-Bmi1 cells in nude mice. hSG-Bmi1 cells dominated by stratified squamous epithelium and hV-Bmi1 cells dominated by columnar cells were established. The new cell lines lay a foundation for the study of the pathogenic mechanisms of laryngeal and voice diseases.